| 查看: 257 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
xtmgah31银虫 (小有名气)
|
[交流]
降落PCR
|
||
|
降落pcr结束后，用PCR产物在进行几个循环的扩增是做什么用的呢？ 94 ℃预变性 5min ; 第1、 2 循环 94 ℃变性 1 min ,64℃退火 1 min , 72 ℃延伸 2 min ; 其后的 18 个循环 ,退火温度每 2个循环降低 1 ℃,其他条件不变; 最后 15 个循环退火温度为55 ℃,其他条件不变; 72℃延伸 10 min。 PCR产物经过一次扩增 (95 ℃0.5 min , 50℃0.5 min , 72℃1 min ,循环 3 次; 72 ℃延伸 10 min) 后 ,用 PCR产物纯化试剂盒(申能博彩)纯化 |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有5人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有7人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有9人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
tangtl
木虫 (正式写手)
小木虫潜水者
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2555.2
- 散金: 30
- 红花: 1
- 帖子: 370
- 在线: 22.5小时
- 虫号: 423004
- 注册: 2007-07-21
- 性别: GG
- 专业: 化学环境污染与健康
2楼2008-09-10 19:50:43
xtmgah31
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 111.6
- 散金: 63
- 帖子: 208
- 在线: 11.4小时
- 虫号: 325021
- 注册: 2007-03-17
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
3楼2008-09-10 20:24:44
peng5053
银虫 (正式写手)
Dr.
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 303
- 散金: 216
- 帖子: 326
- 在线: 90.5小时
- 虫号: 589471
- 注册: 2008-08-29
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):鼓励！欢迎常来！
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):鼓励！欢迎常来！
|
其实是很简单的，所谓降落PCR就是逐步降低退火温度，从而寻找一个最合适的退火温度，简单的说吧，在做PCR的时候只有在合适的退火温度下，引物与模板才能够有效地配对，此时的扩增是以指数的形式增长，当不能很好的配对的时候就是倍数的形式增长。是指每隔一个循环降低1°C反应退火温度，直至达到“Touchdown” 退火温度，然后以此退火温度进行10个左右的循环。该方法最初出 现是为了避开确定最佳退火温度而进行的复杂的反应优化过程。正 确和非正确退火温度之间的任何差异将造成每个循环PCR产物量的两 倍差异（每摄氏度造成4倍差异）。因此相对于非正确产物，正确的 产物可以得到富集。该方法的另一个应用是在确定已知序列肽的DNA序列。 具体过程如下：使用两套与已知序列肽两末端可能配对的简并引物， 这只需要知道一段长为13个氨基酸的肽段序列，5’和3’引物各 长18个碱基（6个氨基酸），两者之间有一个碱基以上的间隔。 使用简并引物即可以进行“TouchdownPCR”。 我曾经试过，效果还是很好的！可能写的不清楚，你们刻以看看相关的文献 |
4楼2008-09-13 02:50:15
