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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 提取的DNA，跑的琼脂糖检测的，这样可以接着往下PCR吗？
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linxia_yuer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
混合配搭: 金币+2 2015-10-27 11:56:57
有dna提取出来的，只是有rna没有消化干净，可能有蛋白残留，但是都不影响你的PCR的，模板不要加多了，质粒PCR模板单一程度高，技术要求很低的。
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21楼2015-10-27 10:42:34
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liping121200

铜虫 (小有名气)
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18楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-10-27 08:27:41
这个得稀释多少倍啊？怎么看啊？
...

我之前提DNA用来做PCR一般没有稀释，直接加1uL就能跑出来，不过条带没有你这么亮，你用多少uL跑的胶？
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好好学习，天天向上
22楼2015-10-27 10:58:22
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liping121200

铜虫 (小有名气)
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18楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-10-27 08:27:41
这个得稀释多少倍啊？怎么看啊？
...

这个要求不高，我之前提的，直接取1uL就够了，你跑电泳点了几uL？一般影响不大，1ng到100ng都可以，鉴于你的浓度高，稀释1倍也行，你用1uL跑PCR应该是没问题的
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23楼2015-10-27 11:07:52
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混合配搭

新虫 (小有名气)
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23楼: Originally posted by liping121200 at 2015-10-27 11:07:52
这个要求不高，我之前提的，直接取1uL就够了，你跑电泳点了几uL？一般影响不大，1ng到100ng都可以，鉴于你的浓度高，稀释1倍也行，你用1uL跑PCR应该是没问题的...

我跑琼脂糖时加了3.5ul啊？稀释一倍？怎么稀释？我原来是抽出1ul加9ul的灭菌水啊？
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24楼2015-10-27 11:52:57
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混合配搭

新虫 (小有名气)
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22楼: Originally posted by liping121200 at 2015-10-27 10:58:22
我之前提DNA用来做PCR一般没有稀释，直接加1uL就能跑出来，不过条带没有你这么亮，你用多少uL跑的胶？...

我使用3.5ul做的琼脂糖检测，上次PCR没跑出来，不知道该稀释多少倍啊。
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25楼2015-10-27 11:56:15
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混合配搭

新虫 (小有名气)
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21楼: Originally posted by linxia_yuer at 2015-10-27 10:42:34
有dna提取出来的，只是有rna没有消化干净，可能有蛋白残留，但是都不影响你的PCR的，模板不要加多了，质粒PCR模板单一程度高，技术要求很低的。

你看我后一次的条带亮度，大概自是多少倍啊
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26楼2015-10-27 11:56:43
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混合配搭

新虫 (小有名气)
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23楼: Originally posted by liping121200 at 2015-10-27 11:07:52
这个要求不高，我之前提的，直接取1uL就够了，你跑电泳点了几uL？一般影响不大，1ng到100ng都可以，鉴于你的浓度高，稀释1倍也行，你用1uL跑PCR应该是没问题的...

稀释一倍，浓度会不会太高了啊？
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27楼2015-10-27 11:58:36
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linxia_yuer

新虫 (初入文坛)
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26楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-10-27 11:56:43
你看我后一次的条带亮度，大概自是多少倍啊...

不知道你跑电泳上样量，可以自己计算下，一般质粒模板纯度高，特异性好，一个pcr体系里面模板质粒几个ng就可以了。多了反而非特异性扩增，看你的亮度估计得稀释10倍加1ul。
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28楼2015-10-27 13:08:37
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liping121200

铜虫 (小有名气)
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27楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-10-27 11:58:36
稀释一倍，浓度会不会太高了啊？...

你跑电泳加的也多，我之前都是加2uL的，PCR反应加的也少，其实问题不大，多稀释几倍也是可以的，主要是看你自己放心咯。你要是实在不放心可以去测一下浓度，根据浓度来稀释比较标准一点。
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好好学习，天天向上
29楼2015-10-27 15:22:29
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混合配搭

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28楼: Originally posted by linxia_yuer at 2015-10-27 13:08:37
不知道你跑电泳上样量，可以自己计算下，一般质粒模板纯度高，特异性好，一个pcr体系里面模板质粒几个ng就可以了。多了反而非特异性扩增，看你的亮度估计得稀释10倍加1ul。...

加1ul是什么意思？一ul样，9ul灭菌水吗？

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30楼2015-10-27 16:05:40
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