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linxia_yuer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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混合配搭: 金币+2 2015-10-27 11:56:57
有dna提取出来的,只是有rna没有消化干净,可能有蛋白残留,但是都不影响你的PCR的,模板不要加多了,质粒PCR模板单一程度高,技术要求很低的。
21楼2015-10-27 10:42:34
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liping121200

铜虫 (小有名气)

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18楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-10-27 08:27:41
这个得稀释多少倍啊?怎么看啊?
...

我之前提DNA用来做PCR一般没有稀释,直接加1uL就能跑出来,不过条带没有你这么亮,你用多少uL跑的胶?
好好学习,天天向上
22楼2015-10-27 10:58:22
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liping121200

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-10-27 08:27:41
这个得稀释多少倍啊?怎么看啊?
...

这个要求不高,我之前提的,直接取1uL就够了,你跑电泳点了几uL?一般影响不大,1ng到100ng都可以,鉴于你的浓度高,稀释1倍也行,你用1uL跑PCR应该是没问题的
好好学习,天天向上
23楼2015-10-27 11:07:52
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混合配搭

新虫 (小有名气)

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23楼: Originally posted by liping121200 at 2015-10-27 11:07:52
这个要求不高,我之前提的,直接取1uL就够了,你跑电泳点了几uL?一般影响不大,1ng到100ng都可以,鉴于你的浓度高,稀释1倍也行,你用1uL跑PCR应该是没问题的...

我跑琼脂糖时加了3.5ul啊?稀释一倍?怎么稀释?我原来是抽出1ul加9ul的灭菌水啊?
24楼2015-10-27 11:52:57
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混合配搭

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22楼: Originally posted by liping121200 at 2015-10-27 10:58:22
我之前提DNA用来做PCR一般没有稀释,直接加1uL就能跑出来,不过条带没有你这么亮,你用多少uL跑的胶?...

我使用3.5ul做的琼脂糖检测,上次PCR没跑出来,不知道该稀释多少倍啊。
25楼2015-10-27 11:56:15
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混合配搭

新虫 (小有名气)

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21楼: Originally posted by linxia_yuer at 2015-10-27 10:42:34
有dna提取出来的,只是有rna没有消化干净,可能有蛋白残留,但是都不影响你的PCR的,模板不要加多了,质粒PCR模板单一程度高,技术要求很低的。

你看我后一次的条带亮度,大概自是多少倍啊
26楼2015-10-27 11:56:43
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混合配搭

新虫 (小有名气)

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23楼: Originally posted by liping121200 at 2015-10-27 11:07:52
这个要求不高,我之前提的,直接取1uL就够了,你跑电泳点了几uL?一般影响不大,1ng到100ng都可以,鉴于你的浓度高,稀释1倍也行,你用1uL跑PCR应该是没问题的...

稀释一倍,浓度会不会太高了啊?
27楼2015-10-27 11:58:36
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linxia_yuer

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
26楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-10-27 11:56:43
你看我后一次的条带亮度,大概自是多少倍啊...

不知道你跑电泳上样量,可以自己计算下,一般质粒模板纯度高,特异性好,一个pcr体系里面模板质粒几个ng就可以了。多了反而非特异性扩增,看你的亮度估计得稀释10倍加1ul。
28楼2015-10-27 13:08:37
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liping121200

铜虫 (小有名气)

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27楼: Originally posted by 混合配搭 at 2015-10-27 11:58:36
稀释一倍,浓度会不会太高了啊?...

你跑电泳加的也多,我之前都是加2uL的,PCR反应加的也少,其实问题不大,多稀释几倍也是可以的,主要是看你自己放心咯。你要是实在不放心可以去测一下浓度,根据浓度来稀释比较标准一点。
好好学习,天天向上
29楼2015-10-27 15:22:29
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混合配搭

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28楼: Originally posted by linxia_yuer at 2015-10-27 13:08:37
不知道你跑电泳上样量,可以自己计算下,一般质粒模板纯度高,特异性好,一个pcr体系里面模板质粒几个ng就可以了。多了反而非特异性扩增,看你的亮度估计得稀释10倍加1ul。...

加1ul是什么意思?一ul样,9ul灭菌水吗?

发自小木虫IOS客户端
30楼2015-10-27 16:05:40
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