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林小仙儿

新虫 (小有名气)

[求助] 2015版药典菌种传代 已有2人参与

哪位大哥大姐做过菌种传代呀？？可不可以教教我！急！！！

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1楼 2015-10-24 18:10:40
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zcqh27

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
具体操作网上有详细的说明。
需要注意的是，你的冻干管，根据15版药典，应该购自CMCC，传代之后，保藏菌株，一定要搞清楚菌株的传代次数，这个，要求比较严格的，工作种子批不得超过5代。
1、火焰灼烧冻干管，滴加无菌水使玻璃裂开，开启冻干管。
2、加入无菌水/无菌生理盐水/培养基，将冻干粉重悬。
3、取一定量的菌液涂平板，其余的全部接种到含液体培养基的摇瓶中；（两种方法，确保菌株能长出来）
4、保藏菌株，可以保藏摇瓶中的，如果摇瓶中的长的很慢（很有可能会很慢），那就在平板上挑菌体接到摇瓶中，再保种（注意，此时已经是第二代的菌株了。）
     如果担心自己搞砸了，那就在保证无菌的条件下，直接接种环挑取冻干菌种，接种到斜面或摇瓶中，冻干管中剩下的菌体妥善保管，以防你接种的操作出现问题。当来，按照药典规定，你的冻干管一旦开启了，就不能在用了。
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14楼2015-10-26 22:30:53
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syhzlsd

木虫 (小有名气)
你的传代目的？
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2楼2015-10-24 18:13:27
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林小仙儿

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-24 18:13:27
你的传代目的？

做药品检验的方法学。

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3楼2015-10-24 18:55:33
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syhzlsd

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 林小仙儿 at 2015-10-24 18:55:33
做药品检验的方法学。
...

取培养的菌液按一定比例接种到新鲜的培养基就可以了啊！
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4楼2015-10-25 11:41:37
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林小仙儿

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-25 11:41:37
取培养的菌液按一定比例接种到新鲜的培养基就可以了啊！...

我想要操作步骤 因为是第一次做 也没有人教……

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5楼2015-10-25 15:27:13
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syhzlsd

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 林小仙儿 at 2015-10-25 15:27:13
我想要操作步骤 因为是第一次做 也没有人教……
...

你现在的菌种是液体菌液？还是固体平板菌种？如果是保种菌液，你取保种菌，先接个100ul到液体培养基试管中(试管约4ml培养基就够了）培养，等到菌长到对数期后期，再按1:50~100的比例接种到新鲜培养基。如取1~2ml培养菌液接种到新鲜的100ml培养基中培养就可以了！
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6楼2015-10-26 11:14:00
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林小仙儿

新虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-26 11:14:00
你现在的菌种是液体菌液？还是固体平板菌种？如果是保种菌液，你取保种菌，先接个100ul到液体培养基试管中(试管约4ml培养基就够了）培养，等到菌长到对数期后期，再按1:50~100的比例接种到新鲜培养基。如取1~2ml培 ...

我买的是冻干粉。能不能给我个具体的操作步骤呢？

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7楼2015-10-26 11:18:13
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syhzlsd

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 林小仙儿 at 2015-10-26 11:18:13
我买的是冻干粉。能不能给我个具体的操作步骤呢？
...

没有说明书吗？
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8楼2015-10-26 11:26:32
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林小仙儿

新虫 (小有名气)
没有

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9楼2015-10-26 11:27:12
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syhzlsd

木虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 林小仙儿 at 2015-10-26 11:18:13
我买的是冻干粉。能不能给我个具体的操作步骤呢？
...

冻干粉取一点根据菌种量用无菌的生理盐水溶解；
然后在固体平板上涂布，倒置平板在培养箱培养；
待平板有克隆长出，挑单克隆到液体培养基中培养，可以现在试管里，4、5ml的培养基就可了；
待菌液培养到对数期后期，你在取菌液接到摇瓶培养就可了！
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10楼2015-10-26 11:33:50
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