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林小仙儿

新虫 (小有名气)

[求助] 2015版药典菌种传代 已有2人参与

哪位大哥大姐做过菌种传代呀??可不可以教教我!急!!!

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zcqh27

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
具体操作网上有详细的说明。
需要注意的是,你的冻干管,根据15版药典,应该购自CMCC,传代之后,保藏菌株,一定要搞清楚菌株的传代次数,这个,要求比较严格的,工作种子批不得超过5代。
1、火焰灼烧冻干管,滴加无菌水使玻璃裂开,开启冻干管。
2、加入无菌水/无菌生理盐水/培养基,将冻干粉重悬。
3、取一定量的菌液涂平板,其余的全部接种到含液体培养基的摇瓶中;(两种方法,确保菌株能长出来)
4、保藏菌株,可以保藏摇瓶中的,如果摇瓶中的长的很慢(很有可能会很慢),那就在平板上挑菌体接到摇瓶中,再保种(注意,此时已经是第二代的菌株了。)
     如果担心自己搞砸了,那就在保证无菌的条件下,直接接种环挑取冻干菌种,接种到斜面或摇瓶中,冻干管中剩下的菌体妥善保管,以防你接种的操作出现问题。当来,按照药典规定,你的冻干管一旦开启了,就不能在用了。
14楼2015-10-26 22:30:53
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

你的传代目的?
2楼2015-10-24 18:13:27
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林小仙儿

新虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-24 18:13:27
你的传代目的?

做药品检验的方法学。

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3楼2015-10-24 18:55:33
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by 林小仙儿 at 2015-10-24 18:55:33
做药品检验的方法学。
...

取培养的菌液按一定比例接种到新鲜的培养基就可以了啊!
4楼2015-10-25 11:41:37
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林小仙儿

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4楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-25 11:41:37
取培养的菌液按一定比例接种到新鲜的培养基就可以了啊!...

我想要操作步骤 因为是第一次做 也没有人教……

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5楼2015-10-25 15:27:13
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

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5楼: Originally posted by 林小仙儿 at 2015-10-25 15:27:13
我想要操作步骤 因为是第一次做 也没有人教……
...

你现在的菌种是液体菌液?还是固体平板菌种?如果是保种菌液,你取保种菌,先接个100ul到液体培养基试管中(试管约4ml培养基就够了)培养,等到菌长到对数期后期,再按1:50~100的比例接种到新鲜培养基。如取1~2ml培养菌液接种到新鲜的100ml培养基中培养就可以了!
6楼2015-10-26 11:14:00
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林小仙儿

新虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-10-26 11:14:00
你现在的菌种是液体菌液?还是固体平板菌种?如果是保种菌液,你取保种菌,先接个100ul到液体培养基试管中(试管约4ml培养基就够了)培养,等到菌长到对数期后期,再按1:50~100的比例接种到新鲜培养基。如取1~2ml培 ...

我买的是冻干粉。能不能给我个具体的操作步骤呢?

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7楼2015-10-26 11:18:13
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

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7楼: Originally posted by 林小仙儿 at 2015-10-26 11:18:13
我买的是冻干粉。能不能给我个具体的操作步骤呢?
...

没有说明书吗?
8楼2015-10-26 11:26:32
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林小仙儿

新虫 (小有名气)

9楼2015-10-26 11:27:12
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 林小仙儿 at 2015-10-26 11:18:13
我买的是冻干粉。能不能给我个具体的操作步骤呢?
...

冻干粉取一点根据菌种量用无菌的生理盐水溶解;
然后在固体平板上涂布,倒置平板在培养箱培养;
待平板有克隆长出,挑单克隆到液体培养基中培养,可以现在试管里,4、5ml的培养基就可了;
待菌液培养到对数期后期,你在取菌液接到摇瓶培养就可了!
10楼2015-10-26 11:33:50
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