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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 蛋白跑胶求助帖。
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smaileon

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 穿白大褂约会 at 2015-10-25 21:16:10
你是分装了，每次用的时候拿出一支用吗？你的样品容易降解吗？如果放在冰箱里，要分装下，每次取出一支来用，其他的不要动，不能反复冻融，反复冻融容易降解！另外问一下，你的蛋白保存在什么buffer中?...

2x的reducing buffer 加样缓冲液

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11楼2015-10-25 22:10:22
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qindengke

新虫 (小有名气)
电极缓冲液最好用新鲜的，跑的样也最好新处理的。

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如dota里补刀一样坚持
12楼2015-10-25 22:26:05
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smaileon

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by qindengke at 2015-10-25 22:26:05
电极缓冲液最好用新鲜的，跑的样也最好新处理的。

好  我就是两块板里面是新鲜的  外面大概回收了几次。我尽量都用新鲜的！

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13楼2015-10-26 07:52:34
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smaileon

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 孤舟摆渡 at 2015-10-25 21:43:17
我们学的是200v 2h

200v...我的最大的都是120v120ma

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14楼2015-10-26 07:53:07
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
制胶的问题，把浓缩胶的比例多一点，试试，祝顺利。
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15楼2015-10-26 09:20:22
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宇文诗畅

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白样品被降解的差不多了···
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做好自己的事！
16楼2015-10-26 13:10:38
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MarchZR

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 孤舟摆渡 at 2015-10-25 21:43:17
我们学的是200v 2h

你们是这样学的，但你操作过么。。。？
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17楼2015-10-28 09:46:17
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MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by smaileon at 2015-10-26 07:53:07
200v...我的最大的都是120v120ma
...

跑SDS-PAGE，80-250v都可，只是电压越大时间越短，一般150V左右跑5omin，保险起见不要超过150，否则胶上蛋白可能跑不开就区别不了，SDS-PAGE，200V还跑2h的，还真是没见过，也不可能，蛋白早就跑过了，考马斯亮蓝都早跑到溶液中去了，，，
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18楼2015-10-28 09:49:12
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MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

就算蛋白降解了也应该是有条带的，你现在条带特别少，你上样量是多少？建议增大上样样品的浓度，点个8ul试试看条带是否会多一些，另外浓缩胶比例多一点，因为下方还有不少亮蓝，所以浓缩胶多一点试试，完了再说
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19楼2015-10-28 09:52:41
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smaileon

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by MarchZR at 2015-10-28 09:52:41
就算蛋白降解了也应该是有条带的，你现在条带特别少，你上样量是多少？建议增大上样样品的浓度，点个8ul试试看条带是否会多一些，另外浓缩胶比例多一点，因为下方还有不少亮蓝，所以浓缩胶多一点试试，完了再说

每次都是点8miu...

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20楼2015-10-28 10:04:18
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