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zhou阳阳

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA提取遇到很郁闷的问题,求助各位已有6人参与

是这样子的,我提取的是昆虫的RNA,提前取好了样本放入trizol中,随后将trizol放入液氮中速冻,放入—80超低温冰箱保存。结果提RNA的时候已经融化的trizol放在冰上竟然又结冰了,导致我在研磨过程中不得不拿出冰面使其溶化,最后导致提取的RNA有降解,谁能告知我Trizol结冰的原因,我该怎样避免?万分感谢。

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liliuyang

新虫 (小有名气)

我们样品都是先在液氮里面研磨然后在加trizol的

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5楼2015-10-31 20:22:59
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lg90

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-10-20 16:54:14
请问你每次提取RNA都是在冰里面操作吗
2楼2015-10-20 16:18:05
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zhou阳阳

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lg90 at 2015-10-20 16:18:05
请问你每次提取RNA都是在冰里面操作吗

恩,是的。

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3楼2015-10-20 17:19:24
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

样本一般都是液氮研磨之后才保存在Trizol中的

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4楼2015-10-31 19:58:37
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wx1308897716

木虫 (小有名气)

神虫

【答案】应助回帖

基本上都是先加液氮磨碎吧,野外采集的也是先放液氮中保存带回来,好像还没听讲你那样弄的

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6楼2015-10-31 20:25:28
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yvonne9044

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我和楼上们观点一样,另外就是我加完trizol都不用冰上操作的

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7楼2015-10-31 23:21:19
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zhangyao7255

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Trizol的主要成分应该有苯酚、异硫氰酸胍、月桂酸钠等东西,液氮中拿出来会析出结晶的,所以不要这样保存材料。
取材时在EP管中加入PBS或者0.75%盐水,放冰上,取完后离心吸去液体,放入液氮或-80度保存。气管等组织要少加入盐水和PBS,因为它们会漂在上面。抽RNA的话,取材要适量,太多容易降解。
8楼2015-10-31 23:56:53
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lr啊锐

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你们确定需要这样做吗?用液氮在研钵里研碎样品后再加入Trizol,有时也会因为温度太低而冻结,还需要等很久才融化。最好的办法就是用钢珠,和抽DNA一样,样品放入试管加2-3钢珠,迅速液氮冻一下,摇碎了再加Trizol没发现有什么不妥~~
走自己的路
9楼2015-11-01 10:49:29
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

想请教一下你在提取RNA时如何去除DNA,谢谢你啦

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10楼2015-12-28 15:30:43
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