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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA提取遇到很郁闷的问题，求助各位
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zhou阳阳

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA提取遇到很郁闷的问题，求助各位 已有6人参与

是这样子的，我提取的是昆虫的RNA，提前取好了样本放入trizol中，随后将trizol放入液氮中速冻，放入—80超低温冰箱保存。结果提RNA的时候已经融化的trizol放在冰上竟然又结冰了，导致我在研磨过程中不得不拿出冰面使其溶化，最后导致提取的RNA有降解，谁能告知我Trizol结冰的原因，我该怎样避免？万分感谢。

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1楼 2015-10-20 16:05:44
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liliuyang

新虫 (小有名气)
我们样品都是先在液氮里面研磨然后在加trizol的

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5楼2015-10-31 20:22:59
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lg90

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-20 16:54:14
请问你每次提取RNA都是在冰里面操作吗
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2楼2015-10-20 16:18:05
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zhou阳阳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lg90 at 2015-10-20 16:18:05
请问你每次提取RNA都是在冰里面操作吗

恩，是的。

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3楼2015-10-20 17:19:24
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

样本一般都是液氮研磨之后才保存在Trizol中的

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4楼2015-10-31 19:58:37
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wx1308897716

木虫 (小有名气)

神虫

【答案】应助回帖

基本上都是先加液氮磨碎吧，野外采集的也是先放液氮中保存带回来，好像还没听讲你那样弄的

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6楼2015-10-31 20:25:28
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yvonne9044

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我和楼上们观点一样，另外就是我加完trizol都不用冰上操作的

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7楼2015-10-31 23:21:19
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zhangyao7255

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Trizol的主要成分应该有苯酚、异硫氰酸胍、月桂酸钠等东西，液氮中拿出来会析出结晶的，所以不要这样保存材料。
取材时在EP管中加入PBS或者0.75%盐水，放冰上，取完后离心吸去液体，放入液氮或-80度保存。气管等组织要少加入盐水和PBS，因为它们会漂在上面。抽RNA的话，取材要适量，太多容易降解。
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8楼2015-10-31 23:56:53
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lr啊锐

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你们确定需要这样做吗？用液氮在研钵里研碎样品后再加入Trizol，有时也会因为温度太低而冻结，还需要等很久才融化。最好的办法就是用钢珠，和抽DNA一样，样品放入试管加2-3钢珠，迅速液氮冻一下，摇碎了再加Trizol没发现有什么不妥~~
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走自己的路
9楼2015-11-01 10:49:29
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)
想请教一下你在提取RNA时如何去除DNA，谢谢你啦

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10楼2015-12-28 15:30:43
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