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liubolin945铁虫 (小有名气)
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[求助]
3'RACE，PCR的问题，Oligo（dT）
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请教大家点问题。 有303bp的片段，要做3’race，用Oligo dT进行反转录之后再进行巢式PCR，但是效果不理想。  做了一个梯度PCR，因为特异性引物都是Tm都是56，而Oligo dT是44，差太多，我不知道怎么确定退火温度，所以做了一个梯度。 左侧是outerPCR，右侧是用对应的Outer PCR产物稀释后进行的Inner PCR。 为什么会弥散啊？这个弥散位置是有条带吗？ 怎么解决oligo退火温度低的问题啊？ 谢谢大家 |
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