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liubolin945

铁虫 (小有名气)

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[求助] 3'RACE，PCR的问题，Oligo（dT）

请教大家点问题。
有303bp的片段，要做3’race，用Oligo dT进行反转录之后再进行巢式PCR，但是效果不理想。

做了一个梯度PCR，因为特异性引物都是Tm都是56，而Oligo dT是44，差太多，我不知道怎么确定退火温度，所以做了一个梯度。
左侧是outerPCR，右侧是用对应的Outer PCR产物稀释后进行的Inner PCR。
为什么会弥散啊？这个弥散位置是有条带吗？
怎么解决oligo退火温度低的问题啊？
谢谢大家

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