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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求同时沉默几个不同基因的方法
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longfeng

金虫 (小有名气)

[交流] 求同时沉默几个不同基因的方法

请教各位i大侠，同时沉默几个不同基因是怎么操作的？
是将每个基因的沉默载体都转化同一个受体，还是将基因设计在一个载体上？
具体的怎么操作，哪位大侠有文献请给介绍两篇。
huawenping@126.com
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1楼 2008-09-06 21:24:46
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
1、共转染

2、也有一个载体表达两个sh-RNA的，但目前做这个的比较少
印象中Invitrogen有
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2楼2008-09-06 21:49:08
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boouy

银虫 (正式写手)
采用assembly-PCR将要沉默的基因特异片段拼接起来构建到同一个载体上转化，这样省不少事。
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3楼2008-09-07 23:55:44
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argnout

金虫 (小有名气)
请问2楼

将不同基因片段拼接起来构建到一个RNAi发卡结构中吗
可以沉默多少个基因
各个基因需要多长片段
21nt的倍数吗

请问你做过?
效果怎么样?
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4楼2008-09-08 10:46:46
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boouy

银虫 (正式写手)
有几个同行都在做类似的尝试，但尚未看到干涉的结果，理论上是可行的。
我目前做的是拼接3个基因片段，由于基因家族同源性问题，我只能拿到140bp左右的特异片段，3个基因拼接为400多bp，载体构建完毕，本月转化，估计年底前可以知道沉默效果。
RNAi载体片段长度与21nt没有关系。
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5楼2008-09-08 11:29:57
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argnout

金虫 (小有名气)
等你的结果
结果出来后请告知一下
谢谢
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6楼2008-09-08 16:07:41
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