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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 从-80度冰箱甘油保存的菌株如何活化对菌株产酶活性影响更小？
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容和buyer

新虫 (小有名气)

[求助] 从-80度冰箱甘油保存的菌株如何活化对菌株产酶活性影响更小？ 已有1人参与

之前做了一下实验，从-80度冰箱里取出菌，取点冰渣后就放到100mL LB培养基里活化，转接了一次，再用于实验，可是菌的产酶活性却没有了。查了些资料有些说要先等冻存管融化后再转到斜面或平板上，然后再转移到液体培养基，不知道这样有效果吗？请懂的小伙伴指导一下。谢谢啦。
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1楼 2015-10-15 19:00:57
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feng-feng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
容和buyer: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-10-16 10:15:19
我都是先划线到平板上培养再接种到液体进行后续试验的，活性不受影响。不过我们做的不是产酶。
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2楼2015-10-16 09:29:05
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容和buyer

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by feng-feng at 2015-10-16 09:29:05
我都是先划线到平板上培养再接种到液体进行后续试验的，活性不受影响。不过我们做的不是产酶。

那能问一下，既然你是划线到平板，那是否就说明，你是把冰箱里的冻存管拿出来后，等融化了再取一点划到平板上吗？谢谢。
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3楼2015-10-16 10:15:12
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feng-feng

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 容和buyer at 2015-10-16 10:15:12
那能问一下，既然你是划线到平板，那是否就说明，你是把冰箱里的冻存管拿出来后，等融化了再取一点划到平板上吗？谢谢。...

不会等融化的，直接那灭菌的吸头或其他什么使劲刮一些划线。反复冻融的话细菌活性肯定受影响
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4楼2015-10-17 16:49:37
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wangzi4ever

金虫 (正式写手)
不知道你的是工程菌还是野生菌，工程菌（大肠）要考虑质粒丢失问题，整合到枯草或酵母基因组上就问题不大了。另一个你是组合型表达还是诱导性表达，你要搞清楚，诱导型注意诱导物和诱导时间。
如果是野生菌菌株，你要找到它适宜的表达培养基配方（既然你保着菌，肯定有人已经做过了），创造适宜的产酶条件，其次，优化你的检测手段，敏感而有利于产酶情况判断。可能还有其他需要注意的，请其他群友补充吧。
祝好，科研坎坷，一路顺分。
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5楼2015-10-18 08:23:05
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wangzi4ever

金虫 (正式写手)
上次回复忘了提了，产酶不理想，问题不一定冻融这个地方，排除法找找原因吧。
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6楼2015-10-18 08:24:38
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容和buyer

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangzi4ever at 2015-10-18 08:23:05
不知道你的是工程菌还是野生菌，工程菌（大肠）要考虑质粒丢失问题，整合到枯草或酵母基因组上就问题不大了。另一个你是组合型表达还是诱导性表达，你要搞清楚，诱导型注意诱导物和诱导时间。
如果是野生菌菌株，你 ...

谢谢相助
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7楼2015-10-18 22:12:22
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