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81631731

金虫 (小有名气)

[求助] 含过表达WNT基因的慢病毒转染hMSC荧光很弱 已有1人参与

最近在转过表达的WNT9A的慢病毒到hMSC,第一次设定MOI为50,100,150,作用24h换液,发现荧光很弱,于是将MOI翻倍补加慢病毒。48h后荧光还是很弱,而且转染率也很低。但是细胞也长满了就接着往下传代,荧光依然较弱。后来放假就么有管了,等节后看看貌似荧光率有上升,但是细胞推挤厉害状态不好,没有接着往下传代(当时真应该再试试的......),而且把曝光时间调长一点貌似也还行(因为当时还转了eGFP,所以心里就默认那个荧光强度才是正常的,这也是考虑不周全的地方)。但是后来又重复了一下MOI,同时领导说作用时间太长影响细胞状态,所以又试着将作用时间改为8h,完全没有荧光啊啊啊!!!

同批转染含eGFP的慢病毒,MOI为50荧光率达100%,而且荧光很亮。

请问这是什么问题?病毒的滴度是10^8数量级,但是为什么转染效率这么低呢???

求大神赐教!!!
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要有梦想,即使遥远~
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张张二

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by 81631731 at 2015-10-12 15:52:54
最近在转过表达的WNT9A的慢病毒到hMSC,第一次设定MOI为50,100,150,作用24h换液,发现荧光很弱,于是将MOI翻倍补加慢病毒。48h后荧光还是很弱,而且转染率也很低。但是细胞也长满了就接着往下传代,荧光依然较弱。 ...

请问你的问题解决了嘛?我也遇到这种问题

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-06-27 10:56:47
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