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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » LPS诱导A549细胞不成功，求助
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wang114

新虫 (初入文坛)

[求助] LPS诱导A549细胞不成功，求助 已有2人参与

各位虫友，小弟在摸索做lps诱导A549发生炎症的模型实验，也参考了许多文献，我用的LPS(sigma 055B5)1、10、20、50ug/ml处理细胞4h，收集细胞提取总RNA，通过荧光定量检测炎症基因（TNF、icam-1、IL-1a）的表达，结果和对照组没有差别，做了几次都是如此，求大侠相助。
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1楼 2015-10-08 20:12:01
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

500微LPS刺激试试。刺激24h
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2楼2015-10-12 13:54:20
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黄金闪闪亮

铜虫 (小有名气)
已本科毕业多年的我表示不懂
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3楼2015-10-12 15:54:38
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wang114

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 帖航 at 2015-10-12 13:54:20
500微LPS刺激试试。刺激24h

需要这么高么，我看文献里最高用了100ug/ml
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4楼2015-10-13 09:43:13
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帖航

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wang114 at 2015-10-13 09:43:13
需要这么高么，我看文献里最高用了100ug/ml...

你看过文献以后难道完全按他的做？反正我用过500微的，但不是A549这个细胞。还有你的时间只有四个小时？四个小时到峰值了吗？你lps刺激完然后直接去做pcr难道不觉得浪费时间？
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5楼2015-10-13 10:28:09
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Color0713

新虫 (初入文坛)
楼主问题解决了吗？我的课题也是用LPS刺激A549 重复性差 现在怀疑药物不稳定 求切磋
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6楼2016-08-09 10:24:26
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sunlk

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by Color0713 at 2016-08-09 10:24:26
楼主问题解决了吗？我的课题也是用LPS刺激A549 重复性差 现在怀疑药物不稳定 求切磋

刺激之前先用无血清培养液饿24h之后加LPS，不过LPS是加到2%FBS的培养液中，刺激24h。这样结果就非常稳定。
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很给力
7楼2016-08-10 15:58:33
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