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suwen1990新虫 (初入文坛)
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[求助]
小鼠细胞基因的过表达 已有2人参与
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| 做小鼠细胞基因的过表达，是用慢病毒表达载体还是腺病毒表达载体构建呢？其基本的实验流程是怎样呢。需不需要酶切、电泳、测序啊。刚接触这方面，不太懂，只是看文献上面这样写的，请各位懂得小伙伴分享一下做过表达的经验，非常感谢啦！ |
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2楼2015-10-08 11:06:54
【答案】应助回帖
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病毒表达系统 腺病毒表达系统 慢病毒表达系统 病毒基因组 双链DNA病毒 RNA逆转录病毒 自主复制 不能 不能 是否整合 病毒基因组游离于宿主基因组外，瞬时表达外源基因 病毒基因组整合于宿主基因组，长时间、稳定表达外源基因 感染细胞类型 感染绝大多数细胞，包括分裂期、非分裂期细胞。 感染绝大多数细胞，包括分裂期、非分裂期细胞。 表达丰度 高水平表达 中水平表达 表达时间 快（1-2 天） 慢（2-4 天） 滴度 滴度可达10E12pfu/mL 滴度可达10E9－10E10TU/mL 克隆容量 可插入高达8kb的外源片段，滴度随插入片段长度增加而降低 可插入不超过8kb的外源片段，滴度随插入片段长度增加而降低 免疫原性 高免疫原性 低免疫原性 RNAi 病毒进入细胞往往引起细胞内干扰素反应，一般情况下不适合做RNAi实验 适合，是RNAi实验的优选工具 基因过表达 包装容量较大，可以满足较大基因的包装，是过表达基因的优选工具 包装容量有限，过表达的基因过大时，病毒滴度受到影响 过表达microRNA 适合 适合，是过表达microRNA实验的优选工具 下调microRNA 有报道但不成熟 有报道但不成熟 是否可以自行扩增 可以 需要特殊包装系统和包装环境 。。。。。。。。。。。。。。。。。。不会粘表格，只能这样了 |
3楼2015-11-13 13:32:15