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thetc

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小猪漫步210: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-10-08 17:14:20
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小猪漫步210 at 2015-10-07 10:16:07
慢病毒低度是10^8,什么是抗性?没有做筛选,,,,不知道咋做,我就想让我的细胞有荧光就行,卖病毒的跟我说你就把这个病毒加到培养基里面,大概是25毫升的培养瓶100微升就够了。...

病毒包装好后   一个病毒带有3个以上的环状遗传物质,一个是用于包装的,一个是用于组装的 还有一个是你的目的基因相关的(荧光蛋白)。 如果你需要将有荧光的细胞比例增加的话,只需要知道你的目的基因质粒上带有什么抗性基因就可以了。  将你的细胞加入带有相应抗生素的培养基中,过几天换培养基 之后剩下的就是 荧光蛋白有表达的 细胞。
加入,希望能学习多一点
11楼2015-10-07 15:09:25
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bluerivers

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先根据抗性筛选一下看一下。抗性是你目的基因所在载体的真核抗性
12楼2015-10-07 20:27:56
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匿名

用户注销 (著名写手)

本帖仅楼主可见
13楼2015-10-07 22:03:47
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
按理说用慢病毒效率应该能达到90%以上,1%肯定是哪里有问题,出问题可能是很多环节
比如,病毒感染的时候加polybrene了吗?
可以多加一点病毒,然后做一遍抗生素筛选,荧光要在感染48-72小时后观察,一定要做阴性对照
你确定用的病毒是可以感染你要用的细胞的吗?比如说MMLV类的病毒只能感染老鼠细胞,所以对3T3有用,但是对HeLa没效果
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
14楼2015-10-08 00:25:59
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影魔在暴走

新虫 (小有名气)

要加转染剂,商用转染剂很好用,转染效率一般都在80%以上

发自小木虫Android客户端
15楼2015-10-08 00:34:48
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dx2013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先你要确定你买的病毒有木有滴度,,你必须做个对照,,,其次你买的病毒能不能够感染你的细胞,,这个要你自己差文献,,最后你在看时间,不知道你的GFP的启动子是哪一个,产生荧光的时间快慢不一样的
16楼2015-10-08 10:03:27
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