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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 慢病毒转染细胞带荧光
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thetc

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小猪漫步210: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-10-08 17:14:20
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小猪漫步210 at 2015-10-07 10:16:07
慢病毒低度是10^8，什么是抗性？没有做筛选，，，，不知道咋做，我就想让我的细胞有荧光就行，卖病毒的跟我说你就把这个病毒加到培养基里面，大概是25毫升的培养瓶100微升就够了。...

病毒包装好后   一个病毒带有3个以上的环状遗传物质，一个是用于包装的，一个是用于组装的 还有一个是你的目的基因相关的（荧光蛋白）。 如果你需要将有荧光的细胞比例增加的话，只需要知道你的目的基因质粒上带有什么抗性基因就可以了。  将你的细胞加入带有相应抗生素的培养基中，过几天换培养基 之后剩下的就是 荧光蛋白有表达的 细胞。
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加入，希望能学习多一点
11楼2015-10-07 15:09:25
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bluerivers

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先根据抗性筛选一下看一下。抗性是你目的基因所在载体的真核抗性
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12楼2015-10-07 20:27:56
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匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
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13楼2015-10-07 22:03:47
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按理说用慢病毒效率应该能达到90%以上，1%肯定是哪里有问题，出问题可能是很多环节
比如，病毒感染的时候加polybrene了吗？
可以多加一点病毒，然后做一遍抗生素筛选，荧光要在感染48-72小时后观察，一定要做阴性对照
你确定用的病毒是可以感染你要用的细胞的吗？比如说MMLV类的病毒只能感染老鼠细胞，所以对3T3有用，但是对HeLa没效果
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
14楼2015-10-08 00:25:59
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影魔在暴走

新虫 (小有名气)
要加转染剂，商用转染剂很好用，转染效率一般都在80%以上

发自小木虫Android客户端
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15楼2015-10-08 00:34:48
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dx2013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先你要确定你买的病毒有木有滴度，，你必须做个对照，，，其次你买的病毒能不能够感染你的细胞，，这个要你自己差文献，，最后你在看时间，不知道你的GFP的启动子是哪一个，产生荧光的时间快慢不一样的
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16楼2015-10-08 10:03:27
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