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小猪漫步210

金虫 (正式写手)

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[求助] 慢病毒转染细胞带荧光已有6人参与

各位大神，有没有做过慢病毒转染细胞使细胞带荧光的？我按照卖家的说明做了，可是做出来的荧光效果特别差。
当时卖家跟我说在25毫升培养皿里面培养细胞，加入100微升的慢病毒，培养两天就可以了，但是我现在看到转染率百分之一左右。各位有没有做过类似的实验的？详细步骤最好。

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1楼2015-10-06 13:21:41

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thetc

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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小猪漫步210: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-10-08 17:14:20

引用回帖:

10楼: Originally posted by 小猪漫步210 at 2015-10-07 10:16:07
慢病毒低度是10^8，什么是抗性？没有做筛选，，，，不知道咋做，我就想让我的细胞有荧光就行，卖病毒的跟我说你就把这个病毒加到培养基里面，大概是25毫升的培养瓶100微升就够了。...

病毒包装好后一个病毒带有3个以上的环状遗传物质，一个是用于包装的，一个是用于组装的还有一个是你的目的基因相关的（荧光蛋白）。如果你需要将有荧光的细胞比例增加的话，只需要知道你的目的基因质粒上带有什么抗性基因就可以了。将你的细胞加入带有相应抗生素的培养基中，过几天换培养基之后剩下的就是荧光蛋白有表达的细胞。