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关于枯草芽孢杆菌168电转的问题 已有7人参与
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最近一直在做枯草芽孢杆菌BS168转化，电转化转都试过，两个多月了，还是没转进去，试的最多的方法是高渗透法。步骤如下： 1）接种B . subtilis于5mlLB培养基中，过夜培养.。 2）取2.6ml过夜培养物接入50ml（LB+0.5M 山梨醇）中，37℃，200-220rpm培养至OD600=0.85~0.95. 3）将菌液冰水浴10 min，然后5000g，5 min，4℃离心收集菌体。 4）用预冷的电转培养基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%葡萄糖），重新吹悬菌体，5000g，5min，4℃离心去上清，如此漂洗4次。 5）将洗涤后的菌体吹悬于1ml电转培养基中，每EP管分装100ul。 6）受态细胞中加入50ngDNA（1~8μl），冰上孵育2min，加入预冷的电转杯（1mm）中，电击一次。 电转仪设置：2.0kv,1mm,电击1次。（电击结果：时间常数基本上都是五点几）电击完毕取出杯子并立即加入1ml RM（LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇），37℃，100rpm，复苏3h后，涂板。37℃，过夜培养。 中间的那个电转培养基中的葡萄糖也有人换成甘油的，我也试过好几次，都没有转化出来。还有人加7.5%的甜菜碱的，我也试过，也没转出来。 跪求大神来帮帮忙啊  |
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