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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因扩增
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fancy868

[交流] 基因扩增

我现在需要做的实验是转一个内源基因到玉米中去，该基因属于一个基因家族，mRNA长度为3000多bp，请问可不可以一次性扩增得到cDNA全序列，如何做？如何设计引物 ？还有就是请问一下转基因，一般是不是转的cDNA序列 ？

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-12 at 09:16 ]
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1楼 2008-09-02 11:05:18
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lipishun

金虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-12 16:07
植物表达载体一般都是优化了的，有CaM35S启动子或者是泛素启动子。另外如果基因cDNA超过2000bp的话，有文献报道，用基因序列要好些，我做过，但是刚做载体构建，就要毕业了。你可以尝试比较一下，说不定这个也可以发一篇小小的文章。哈哈。
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6楼2008-09-03 15:44:30
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boouy

银虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
可以一次性扩增得到cDNA全序列：直接设计引物扩增。
如何设计引物？参加primer 3或者本论坛有关讨论。
转基因方面，如果做超表达，一般是转cDNA。
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2楼2008-09-02 11:58:00
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fancy868

谢谢,我再问一下,转cDNA是转整个序列呢还是只要转ORF就可以了 ？
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3楼2008-09-03 07:37:27
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boouy

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复
通常ORF即可，不过，有人说UTR序列影响转录和翻译，因此全长cDNA为更好的选择。设计引物的时候可以略微照顾一下UTR （启动子到ATG的距离长一点，如>50bp），特别是5'UTR，使得转录机器和翻译机器能有效接合。
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4楼2008-09-03 08:50:27
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