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紫眸玉儿

木虫 (小有名气)

[求助] 烟草生理指标CAT检测 已有2人参与

最近，本人在做烟草烟草生理指标CAT检测，用紫外分光仪，0.1M的H2O2 5毫升+0.1M的PH7.0的磷酸缓冲液20毫升（即按1：4的比例）混匀，即为CAT反应液。
CAT的测定：0.1毫升（或50微升）酶液+2.5毫升反应液，240纳米下比色，每隔1分钟读数1次，共读数3次。
结果显示：OD值变化太小，甚至只有H2O2变化的本底水平，请教大侠们，这是什么原因，接下来怎么做？
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1楼 2015-09-25 10:39:08
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qiushi0312

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定是用的石英比色皿？还有可能是酶的浓度太低。过氧化氢酶活性测定变化值本来就低的
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2楼2015-09-25 14:42:58
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yvonne9044

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也遇到过这种情况，值几乎没变化，H2O2建议用新配的，因为容易变质，还有酶活受很多因素影响，酶液浓度是个问题，个人觉得这种敏感实验需要室温比较低，你要是在南方可能酶活也容易降解，还有就是你叶子是保存的还是新鲜提的，另外就是分光光度计是不是很准，我觉得要是有条件试试酶标仪，注意比色杯，我记得需要用石英的，你再确定下，祝好

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3楼2015-09-25 18:03:51
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紫眸玉儿

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qiushi0312 at 2015-09-25 14:42:58
确定是用的石英比色皿？还有可能是酶的浓度太低。过氧化氢酶活性测定变化值本来就低的

是石英比色皿，如果是酶的浓度过低，应该怎样调条件？
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4楼2015-09-25 22:27:35
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紫眸玉儿

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yvonne9044 at 2015-09-25 18:03:51
我也遇到过这种情况，值几乎没变化，H2O2建议用新配的，因为容易变质，还有酶活受很多因素影响，酶液浓度是个问题，个人觉得这种敏感实验需要室温比较低，你要是在南方可能酶活也容易降解，还有就是你叶子是保存的还 ...

H2O2是新配的，叶子提取是新鲜的，之前测其他生理指标时紫外分光光度仪也比较准的，比色皿确定是石英的！如果是酶浓度太低，应该怎样调整实验，请大侠指教！
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5楼2015-09-25 22:31:08
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yvonne9044

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 紫眸玉儿 at 2015-09-25 22:31:08
H2O2是新配的，叶子提取是新鲜的，之前测其他生理指标时紫外分光光度仪也比较准的，比色皿确定是石英的！如果是酶浓度太低，应该怎样调整实验，请大侠指教！...

我也懂得不多，不是大侠，不知道建议有没有用， H2O2,不要新配的，要新买的最好，另外你测不测POD,我记得也用H2O2,那个酶液是怎么配的，是一种酶液测好几个生理指标吗？四度保存的？你试试新鲜提取，低温研磨，直接测量，酶液还有个浓度问题，不知你用多少克叶子加多少缓冲液

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6楼2015-09-26 10:07:16
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