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LIAOLU

新虫 (小有名气)

[交流] 关于煮沸变性和超声波变性的问题是已有4人参与

我想问一下为什么如果蛋白质需要层析的时候我们用的是超声波破碎法而不是煮沸

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renzhiq

木虫 (小有名气)


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你要做什么层析?
不明白,你的超生波变性又是怎么回事……真不知道超声能变性 那得超成啥样啊?

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2楼2015-09-18 23:55:30
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LIAOLU

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by renzhiq at 2015-09-18 23:55:30
你要做什么层析?
不明白,你的超生波变性又是怎么回事……真不知道超声能变性 那得超成啥样啊?

我要纯化蛋白质。用的是树脂层析

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3楼2015-09-19 07:11:42
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viki_MDK

银虫 (正式写手)


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超声是用来破壁的
4楼2015-09-19 08:36:59
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renzhiq

木虫 (小有名气)


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3楼: Originally posted by LIAOLU at 2015-09-19 07:11:42
我要纯化蛋白质。用的是树脂层析
...

超声是破碎,是让细胞中的蛋白质释放出来,不是变性。当然你也可以采用其他的方法,如均质机破碎,反复冻溶等……
煮是让蛋白变性,只有蛋白电泳时候会可能用到……

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5楼2015-09-19 09:43:23
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qlw4567

铁杆木虫 (著名写手)


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我觉得吧,超声背身是种机械波,当功率比较大的时候,是可以致使蛋白质的构象发生一定的变化的,而直接加热一般导致的溶液中水分子更加活跃,容易破坏维持蛋白质构象的氢键,所以更加容易变形。
努力和媳妇一起上完博士
6楼2015-09-19 09:43:23
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LIAOLU

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by qlw4567 at 2015-09-19 09:43:23
我觉得吧,超声背身是种机械波,当功率比较大的时候,是可以致使蛋白质的构象发生一定的变化的,而直接加热一般导致的溶液中水分子更加活跃,容易破坏维持蛋白质构象的氢键,所以更加容易变形。

哦哦。难怪破坏包涵体用超声波破碎

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7楼2015-09-19 12:42:51
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LIAOLU

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by renzhiq at 2015-09-19 09:43:23
超声是破碎,是让细胞中的蛋白质释放出来,不是变性。当然你也可以采用其他的方法,如均质机破碎,反复冻溶等……
煮是让蛋白变性,只有蛋白电泳时候会可能用到……
...

明白了。也可以让包涵体中的蛋白释放出来吗

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8楼2015-09-19 12:43:39
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LIAOLU

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by qlw4567 at 2015-09-19 09:43:23
我觉得吧,超声背身是种机械波,当功率比较大的时候,是可以致使蛋白质的构象发生一定的变化的,而直接加热一般导致的溶液中水分子更加活跃,容易破坏维持蛋白质构象的氢键,所以更加容易变形。

请问一般功率多大。我下午就要做了。

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9楼2015-09-19 12:44:12
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renzhiq

木虫 (小有名气)


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引用回帖:
8楼: Originally posted by LIAOLU at 2015-09-19 12:43:39
明白了。也可以让包涵体中的蛋白释放出来吗
...

包涵体也能释放,但释放了还是包涵体。
超声的话,一般我选择超2s,停3s,200W。停的时间可以更长,有利于降温……
另外,特别提醒,超声时容器要用玻璃容器……容器小一点,效果会好一些,我每次超声体积10到20毫升体积左右,效果很好,超声结束时都是澄清的,我重悬菌体大概是1g菌体10ml缓冲液
如有疑问,在问我……

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10楼2015-09-19 13:15:04
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