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lpuks

铜虫 (初入文坛)

[交流] 大家都是用什么方法挑选细胞单克隆的,请教交流一下 已有4人参与

大家都是用什么方法挑选细胞单克隆的,请教交流一下?
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loolilooli

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
将细胞计数后分到96孔板里,每个孔里的细胞数应为0.5,会有一部分孔中只有单个细胞,把这些细胞进行培养扩增即可;或者细胞稀释后铺到大皿里,贴住后观察单细胞的位置并标记,等克隆长大。
2楼2015-09-17 13:25:47
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cryingmyth

铁杆木虫 (小有名气)

挑到96孔板里面,对细胞做有限稀释
3楼2015-09-18 13:26:30
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般细胞瞬转的话是采用 有限稀释法,稀释稀释稀释,一直稀释到孔里只有一个细胞然后培养,如果是构建稳定细胞系就是MTX加压筛选,不断的筛选挑取单克隆,也能得到,看你做什么吧
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-09-18 13:50:46
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liumaomao

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我当时是转染了一个含有GFP基因的载体,然后直接使用分筛型流式细胞仪进行分筛,直接是每孔一个细胞,而且还都是表达比较高的细胞。你也可以用流式进行分筛,省去大量看孔板以及手动分筛的时间
5楼2015-10-19 15:48:19
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