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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问大家 双酶切之后的产物可以冻起来再做胶回收吗
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yangtzelv

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.柱子没啥区别，提取质粒的，纯化的，胶回收的都一样，基本都是代加工之后加上自己的商标。我一向混着用的，效果一样。可以买层析柱，自己配各种试剂，效果不比公司买的，尤其是对于大批量质粒抽提实验，买大的层析柱，省时省力。
2. 先放-20摄氏度冰箱，试剂盒来了再做实验，完全没问题。酶切体系在-20℃条件下不会有活性的。大胆做。你想想，你酶切纯化好的片段放哪里了？哪有那么容易降解？你放几个月不反复冻融，不室温长时间放置，不会有问题的。
-------------------
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11楼2015-09-10 16:04:12
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yangtzelv

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-09 21:31:48
当然可以，如果担心，你可以先热灭活内切酶再放-20度
柱子都是通用的，甚至做质粒的柱子也可以用来胶回收

正解
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12楼2015-09-10 16:04:46
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yangtzelv

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 仇峰12306 at 2015-09-10 09:20:53
不同公司的柱子是不可以混用的，因为有可能出现柱子堵塞等等。酶切后最好立即做回收，因为有可能造成碱基丢失。

不要误导新手呀，这几个纯化的层析原理和层析材料是一样的。
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13楼2015-09-10 16:06:11
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evangelina

无虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-09-10 13:18:44
跑胶分离之后，哪里来的“内切酶”？...

专家，麻烦你多花点时间读读楼主的问题
“由于买的胶回收盒子还没到，所以酶切过夜的产物可以先冻起来再跑电泳胶回收吗？”

他是酶切过的产物要过夜，再跑胶回收
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14楼2015-09-10 16:06:44
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-11 23:02:31
引用回帖:
8楼: Originally posted by 仇峰12306 at 2015-09-10 14:13:47
大哥，你做过吗？
人家试剂公司精华在柱子那，你要是随随便便都可以用，那试剂公司怎么拉拢客户啊，都干毛线用的啊？还有那试剂盒里面的溶液有的也不一样好吧
第二，酶切过的东西你的酶切位点都暴露在外边了，时 ...

试剂公司的精华在于很多人过于依赖现成的试剂盒，以前的前辈们连提DNA的苯酚都是从粉末自己配制的。试剂公司的推销很多都是高中毕业的，我们作为有独立思考能力的科研人员，不应该被他们随便拉拢。你们说的什么暴露了的酶切位点我不懂，反正酶切过胶回收后的DNA我放过三年照样管用。
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15楼2015-09-10 16:11:41
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evangelina

无虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yangtzelv at 2015-09-10 16:04:12
1.柱子没啥区别，提取质粒的，纯化的，胶回收的都一样，基本都是代加工之后加上自己的商标。我一向混着用的，效果一样。可以买层析柱，自己配各种试剂，效果不比公司买的，尤其是对于大批量质粒抽提实验，买大的层析 ...

这才像有经验的人会说的话
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16楼2015-09-10 16:13:53
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yangtzelv

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-10 16:13:53
这才像有经验的人会说的话...

客气了
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17楼2015-09-10 16:15:35
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)
可以冻起来,问题不大,柱子可以通用,回收的方法都差不多。

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18楼2015-09-11 08:01:53
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running113

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
4度放，会降解，但问题不大。

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SCI我来了！！！
19楼2015-09-11 08:04:43
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
20楼2015-09-11 08:14:40
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