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sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

[求助] 求解关于总是水出带的问题,能否分析一下哪个地方有污染

求解关于总是水出带的问题,能否分析一下哪个地方有污染
图片1.png
本来在做构建载体,涂布之后挑取单菌落进行培养,本来想做一下特异检测,然后提质粒双酶切检测,送样测序,无误之后进行诱导表达

但是在特异检测这里出问题了,用水代替模板跑了一个,但是同样有一个一模一样的条带(200左右),我的目的片段也是200左右

以为是哪个地方污染了,就把水换了下,依然出带
求解关于总是水出带的问题,能否分析一下哪个地方有污染-1
图片2.png



然后换了buffer,dNTP,引物重新稀释,换电泳液,枪头离心管换新的灭菌

求解关于总是水出带的问题,能否分析一下哪个地方有污染-2
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求解关于总是水出带的问题,能否分析一下哪个地方有污染-3
图片4.png

依然都是有条带啊,问题是总是随机的,菌液每次也基本都是随机的,按理说污染了的话应该每次都有或者每次都没有啊,为什么会随机呢?

用M13的引物47、48,水做模版又做了一次


求解关于总是水出带的问题,能否分析一下哪个地方有污染-4
图片5.png

还是这样,水做模板一个有带一个只有引物二聚体,请问有知道出现这种情况的原因的吗?构建载体耽误几个月了,非常感谢!
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