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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞转染的质粒你提对了吗
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xiaomili1206

新虫 (初入文坛)

[交流] 细胞转染的质粒你提对了吗 已有3人参与

听说细胞转染的质粒提取要求无内毒素、蛋白污染，是所有的转染都是这个要求吗？靠谱吗？大家给点意见吧
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1楼 2015-09-08 09:35:18
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MarchZR

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
细胞转染瞬时转染当然不能用内毒素和蛋白污染了，真核蛋白表达不同于原核蛋白表达，质粒要求严格，有时原核也得要去内毒素啊，蛋白污染就不用说了，当然不能有污染
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7楼2015-09-10 14:51:05
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zbxky

铁虫 (小有名气)
是的是的
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2楼2015-09-08 10:13:48
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dealer

铜虫 (初入文坛)
是的，多数有要求，会影响到转染效率
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3楼2015-09-08 10:34:23
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众星揽月

新虫 (初入文坛)
做转染实验，质粒的纯度是一定要的。OD值260/280在1.8左右，是一个基本的指标，即没有蛋白和RNA 污染。最重要的是内毒素要清除干净。内毒素清除的效果，才是是否用于转染的决定指标。
内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，很稳定，需要很长时间高温或强化试剂才能清除干净，对宿主是有毒性的。目前用的质粒大部分是从大肠杆菌中提取出来的。在提取质粒的过程中如果不经过特殊步骤处理是很难将内毒素取出干净的。残存内毒素的质粒倍转染进细胞后就会对细胞造成伤害，即使质粒浓度再高也达不到理想的转染效果。
英格恩 转染试剂 ECL发光液  RNA DAN 转染试剂
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4楼2015-09-08 11:04:50
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