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sf9昆虫细胞表达——Western Blot验证表达效果，多条带都是目的带？
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目的：最近在尝试用昆虫细胞做杆状病毒转染表达重组蛋白，目的蛋白接近60kD。 样品：现在我有三个重组DNA（编号1,2,3，指代下图），大小差别不大，氨基酸组成差异小于10%。pfastBac 1重组质粒转座DH10BAC后为白斑，酶切位点选用BamHI和HindIII，C端加入6*HIS-tag标签。 操作：我用转染sf9 (6孔板) 一周的培养基上清直接转至T25的细胞瓶中，72h收集细胞做的WB。当时细胞的状态没有拍照，WB的图谱如图所示。 问题：除了目的带（理论大小）之外，还有很多其他条带，难道都是表达产物（可以识别his单抗）？请教各位大神帮忙，有什么原因可能会导致多条带的情况啊，降解？ 现在不知道如何验证了！？先谢过大家了！  WB.jpg |
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dalian0725
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3楼2015-11-25 10:57:13