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liuruikiki

新虫 (初入文坛)

[求助] sf9昆虫细胞表达——Western Blot验证表达效果,多条带都是目的带?

目的:最近在尝试用昆虫细胞做杆状病毒转染表达重组蛋白,目的蛋白接近60kD。
样品:现在我有三个重组DNA(编号1,2,3,指代下图),大小差别不大,氨基酸组成差异小于10%。pfastBac 1重组质粒转座DH10BAC后为白斑,酶切位点选用BamHI和HindIII,C端加入6*HIS-tag标签。
操作:我用转染sf9 (6孔板) 一周的培养基上清直接转至T25的细胞瓶中,72h收集细胞做的WB。当时细胞的状态没有拍照,WB的图谱如图所示。
问题:除了目的带(理论大小)之外,还有很多其他条带,难道都是表达产物(可以识别his单抗)?请教各位大神帮忙,有什么原因可能会导致多条带的情况啊,降解?
现在不知道如何验证了!?先谢过大家了!

sf9昆虫细胞表达——Western Blot验证表达效果,多条带都是目的带?
WB.jpg
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liuruikiki

新虫 (初入文坛)

给自己顶一下,会不会是制备的杆粒问题??
2楼2015-09-09 22:13:03
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dalian0725

新虫 (小有名气)

我也是做这个的, 我想知道你提取杆粒的方法及转染的具体方法(包括培养液的配制)
3楼2015-11-25 10:57:13
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