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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求解细菌恢复毒力的操作细节？
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落雨花殇

新虫 (初入文坛)

[求助] 求解细菌恢复毒力的操作细节？ 已有1人参与

细菌小鼠腹腔感染浓度如何确定？小鼠体重有没有要求？需要多少只小鼠？小鼠处死后如何提毒，最近实验细菌未成功感染估计毒力不够，需做这个，不知道怎么做？求大神指导指导

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1楼 2015-08-31 14:42:34
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smilingworld

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般都是用10的5次方或者7次方的菌液去感染小鼠，当然有的菌致病性毒力弱可以提升到9次方左右。小鼠要用6到8周的左右，一次实验至少要用3只小鼠。建议楼主寻找一下所研究细菌的相关文献，里面会有很详细的描述。楼主所说的提毒指的是什么？没有成功从小鼠体力恢复得到细菌么？细菌感染后的小鼠，看是否有小鼠死亡，测体重，观察毛的光亮程度以及小鼠的活跃程度来判断细菌是否将小鼠致病。没有感染成功，可能是菌的毒力弱，也可能是鼠对此种菌敏感，比如，菌带鞭毛，容易被吞噬细胞所发现被清理掉。
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2楼2015-08-31 15:24:09
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落雨花殇

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by smilingworld at 2015-08-31 15:24:09
一般都是用10的5次方或者7次方的菌液去感染小鼠，当然有的菌致病性毒力弱可以提升到9次方左右。小鼠要用6到8周的左右，一次实验至少要用3只小鼠。建议楼主寻找一下所研究细菌的相关文献，里面会有很详细的描述。楼主 ...

提毒是指如果小鼠感染成功，那把小鼠处理后取什么来培养菌呢？血液还是肝脏，如何把菌分离出来？看文献有说把菌腹腔注射感染转种两次再取孢子配一定浓度悬液造模

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3楼2015-08-31 19:28:45
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smilingworld

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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3楼: Originally posted by 落雨花殇 at 2015-08-31 19:28:45
提毒是指如果小鼠感染成功，那把小鼠处理后取什么来培养菌呢？血液还是肝脏，如何把菌分离出来？看文献有说把菌腹腔注射感染转种两次再取孢子配一定浓度悬液造模
...

可以按着文献上说的去做，这要根据你实验的目的，你做这个动物实验是要观察什么，得到什么结果。还有，既然观察细菌的毒力，脾脏可不可以取出，然后涂到培养基上看菌数变化。感染完动物后，解剖，取器官，然后用灭菌后的均质器（中文名具体不知道，英文名：homogenizer），加入1ml PBS 把器官捣烂成液体，然后稀释涂培养基。假如，楼主用的菌毒力弱，小鼠在感染后没有死亡，只是在感染后的24或者48小时内有体重减轻，活跃度降低的表现，也可以说是感染成功。提菌按上述方法即可。
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4楼2015-08-31 20:47:33
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落雨花殇

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by smilingworld at 2015-08-31 20:47:33
可以按着文献上说的去做，这要根据你实验的目的，你做这个动物实验是要观察什么，得到什么结果。还有，既然观察细菌的毒力，脾脏可不可以取出，然后涂到培养基上看菌数变化。感染完动物后，解剖，取器官，然后用灭 ...

嗯，我可以试试，用的老鼠比较大有没有影响呢？我实验用的昆明小鼠很不稳定，来的时候16-19g，我分组时便26g了，现在一个星期过去都三十几克了

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5楼2015-09-01 10:24:32
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smilingworld

新虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by 落雨花殇 at 2015-09-01 10:24:32
嗯，我可以试试，用的老鼠比较大有没有影响呢？我实验用的昆明小鼠很不稳定，来的时候16-19g，我分组时便26g了，现在一个星期过去都三十几克了
...

小鼠长的快没有问题，即便就算是体重有差别，三只小鼠都在30多克也没有什么。个体差异不同，最后的实验结果也会不同。老鼠的周龄相同，喂养的环境以及条件都相同，只是排除个体生长快慢，这个是可以接受的。
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6楼2015-09-01 11:12:10
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落雨花殇

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by smilingworld at 2015-08-31 20:47:33
可以按着文献上说的去做，这要根据你实验的目的，你做这个动物实验是要观察什么，得到什么结果。还有，既然观察细菌的毒力，脾脏可不可以取出，然后涂到培养基上看菌数变化。感染完动物后，解剖，取器官，然后用灭 ...

取完器官捣碎是需要在超净台做吗？稀释涂板大概稀释几倍呢？

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7楼2015-09-03 23:52:17
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smilingworld

新虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 落雨花殇 at 2015-09-03 23:52:17
取完器官捣碎是需要在超净台做吗？稀释涂板大概稀释几倍呢？
...

最好在超净台做，避免污染。稀释这个问题，说不好，我不知道你用菌浓度，而且感染动物后，菌是增长，还是减弱。假如用了7次方的菌感小鼠，第一次稀释的时候最好多做几个，控制菌落在一定范围，比如30到300，20到200。大概稀释到－4到－7吧
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8楼2015-09-04 12:26:37
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