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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 1297286362 at 2015-09-03 21:26:05
亲们,我找到原因了,我的PCR产物是高GC序列,做菌液PCR时一般的酶扩增的效果不好,我使用了primeSTAR,效果非常好,如果遇到类似的 问题可以借鉴一下。

哎,其实问题都很简单,只是一个酶,有的时候做实验久了,往往就不喜欢考虑最简单的原因了~还是优化体系,摸索条件,扩增当然不要用普通的酶了,我们都用热启动酶,或者热启动高保真酶,你的模板GC含量高,当然更不选择一般的酶了,楼主有待了解更多的酶种类啊,选择,适用性等等
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
11楼2015-09-06 09:40:01
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1297286362

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-09-06 09:40:01
哎,其实问题都很简单,只是一个酶,有的时候做实验久了,往往就不喜欢考虑最简单的原因了~还是优化体系,摸索条件,扩增当然不要用普通的酶了,我们都用热启动酶,或者热启动高保真酶,你的模板GC含量高,当然更不 ...

是的,但是我以前做的也是这个基因,PCR产物是480bp,也是高GC序列,用rTaq和ExTaq做出来过,我也不知道这是什么原因,不过还得谢谢亲提醒。
喜欢你就诅咒你!
12楼2015-09-11 20:59:30
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咸鱼~翻身

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 1297286362 at 2015-09-03 21:26:05
亲们,我找到原因了,我的PCR产物是高GC序列,做菌液PCR时一般的酶扩增的效果不好,我使用了primeSTAR,效果非常好,如果遇到类似的 问题可以借鉴一下。

之前的pcr没用这个酶,产物条带亮不亮
13楼2015-11-30 09:18:06
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