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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR的结果显示：阳性克隆较少，且目的条带比较浅
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 1297286362 at 2015-09-03 21:26:05
亲们，我找到原因了，我的PCR产物是高GC序列，做菌液PCR时一般的酶扩增的效果不好，我使用了primeSTAR,效果非常好，如果遇到类似的 问题可以借鉴一下。

哎，其实问题都很简单，只是一个酶，有的时候做实验久了，往往就不喜欢考虑最简单的原因了~还是优化体系，摸索条件，扩增当然不要用普通的酶了，我们都用热启动酶，或者热启动高保真酶，你的模板GC含量高，当然更不选择一般的酶了，楼主有待了解更多的酶种类啊，选择，适用性等等
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
11楼2015-09-06 09:40:01
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1297286362

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-09-06 09:40:01
哎，其实问题都很简单，只是一个酶，有的时候做实验久了，往往就不喜欢考虑最简单的原因了~还是优化体系，摸索条件，扩增当然不要用普通的酶了，我们都用热启动酶，或者热启动高保真酶，你的模板GC含量高，当然更不 ...

是的，但是我以前做的也是这个基因，PCR产物是480bp，也是高GC序列，用rTaq和ExTaq做出来过，我也不知道这是什么原因，不过还得谢谢亲提醒。
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喜欢你就诅咒你！
12楼2015-09-11 20:59:30
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咸鱼~翻身

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 1297286362 at 2015-09-03 21:26:05
亲们，我找到原因了，我的PCR产物是高GC序列，做菌液PCR时一般的酶扩增的效果不好，我使用了primeSTAR,效果非常好，如果遇到类似的 问题可以借鉴一下。

之前的pcr没用这个酶，产物条带亮不亮
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13楼2015-11-30 09:18:06
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