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Queetree

新虫 (初入文坛)

你之前说的1和2具体应该怎么操作呢?
1用proteinA/G的洗脱液洗脱的ab,挑PH后可以用于与抗原结合,我纯化的ab就用1M This挑ph到7附近就可以直接用于ELISA了————tris用多少pH值得?
2洗脱后会发生你说的情况,但及时调整ph或者去除其他变性条件,ab是可以回复的,依然可以用于与ag的结合————洗脱抗原抗体特异性结合又不破坏抗体活性,应该选择怎样的洗脱液呢?
11楼2015-08-29 21:51:05
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
9楼: Originally posted by Queetree at 2015-08-29 21:40:57
谢谢你的解答。
1、这个抗体已经制作了好几年了,是上一届移交到我手上的,我刚拿到的时候还能用(也就是抗Hela总蛋白也能见清晰条带)。
2、做WB时,跑胶上样的蛋白就是煮沸后上的样,是为了让它充分变性,而WB ...

呜呜,我没做过WB,只做蛋白纯化,和SDS-PAGE,具体不太懂,只是感觉,谢谢
12楼2015-08-30 09:49:41
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

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觉得抗体效价变低了,使用时直接降低抗体稀释度不就行了,何必废那么大力气去纯化抗体,纯化本来就会损失很多。WB步骤那么多,是否确定是一抗问题,抗原也有可能降解,二抗也可能失活,一抗如果之前没问题,不存在反复冻融,出问题的可能性还是小的
13楼2015-08-30 17:48:52
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