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Queetree

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你之前说的1和2具体应该怎么操作呢？
1用proteinA/G的洗脱液洗脱的ab，挑PH后可以用于与抗原结合，我纯化的ab就用1M This挑ph到7附近就可以直接用于ELISA了————tris用多少pH值得？
2洗脱后会发生你说的情况，但及时调整ph或者去除其他变性条件，ab是可以回复的，依然可以用于与ag的结合————洗脱抗原抗体特异性结合又不破坏抗体活性，应该选择怎样的洗脱液呢？

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11楼2015-08-29 21:51:05

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hc-material

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引用回帖:

9楼: Originally posted by Queetree at 2015-08-29 21:40:57
谢谢你的解答。
1、这个抗体已经制作了好几年了，是上一届移交到我手上的，我刚拿到的时候还能用（也就是抗Hela总蛋白也能见清晰条带）。
2、做WB时，跑胶上样的蛋白就是煮沸后上的样，是为了让它充分变性，而WB ...

呜呜，我没做过WB，只做蛋白纯化，和SDS-PAGE，具体不太懂，只是感觉，谢谢

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12楼2015-08-30 09:49:41

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314300420

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【答案】应助回帖

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觉得抗体效价变低了，使用时直接降低抗体稀释度不就行了，何必废那么大力气去纯化抗体，纯化本来就会损失很多。WB步骤那么多，是否确定是一抗问题，抗原也有可能降解，二抗也可能失活，一抗如果之前没问题，不存在反复冻融，出问题的可能性还是小的

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13楼2015-08-30 17:48:52

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