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高GC含量DNA序列测序应注意哪些因素
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小弟最近在做几个高GC含量DNA的cloning,今天刚刚完成全部的cloning，并跑了带确认长度没问题。于是，就开始准备测序了。不过小弟以前并没有做过高GC含量DNA的测序，不清楚要注意哪些因素（比方说primer改怎么设计，PCR时要注意哪些等等之类的），才能保证序列能够被读出的同时，亦能保证其可信性（准确率）。因为我们实验室，我是第一个开始做高GC含量DNA的cloning，周围能够请教的人不多。还请各位大神走过路过帮帮小弟一下，万分感激。 四个高GC含量DNA片段的长度都在1600 bp 到1770 bp。而这四个片段的GC含量分别是，45% （这个其实不算高），62%， 75%，78%。我们实验室测序PCR用的酶是applied biosystems 的Big Dye.看了官网的说明书未发现关于高GC含量DNA做测序时的注意事项（也可能是我眼花了）。 还请各位拨冗指点小弟。 谢谢 |
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