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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR分析
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生物太忧桑

银虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR分析 已有1人参与

问题很基础
我是跟着师兄做实验的。现在QPCR结果出来了。整理了目的基因CT值，内参CT值。现在要计算△CT，△△CT，还有2^-△△CT。他也不讲这些参数是做什么用的。要我自己明白。我手里有一本QPCR仪器的书。上面原理我基本看了。ct，溶解曲线可以看懂，但不明白为什么要算后面的值，也不知如何用
请问要怎样快速理解上面内容？
然后我们要检测目的基因在不同条件下的表达量，需要用什么统计方法呢，哪个软件可实现？我学过统计学。

最后想问下，同一个目的基因的溶解曲线都是单峰，但不同样品的溶解温度不同，可能什么原因造成？
多谢大神指点
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1楼 2015-08-20 22:56:30
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AIKX

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
码了半天字 竟然说回复有敏感词汇 我也是醉了 LZ可以下2^-△△CT方法提出的最早文章，Washington state U 和Invitrogen的两个教授提出的，希望对你有帮助
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Fearskeeponesmall!
2楼2015-08-20 23:16:59
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AIKX

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-08-20 23:32:03
第二个问题，溶解曲线是衡量引物质量的一个重要指标，如果呈现单峰，说明扩增特异性较高，LZ可以通过标准曲线进一步验证扩增效率，通常需要位于90%-110%范围内，同时R2>95%. 至于不同样品的溶解温度有差异，LZ是指溶解曲线单峰的位置不一样？这可能与每个样品浓度以及纯度不一样造成的，这可能是RNA提取后没有对浓度均一化，或者反转录操作不当引起的，不过只要引物扩增效率好且是单峰，这个并不存在影响。
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Fearskeeponesmall!
3楼2015-08-20 23:22:51
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