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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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anmt

银虫 (小有名气)

[交流] 求助:两个不同厂家的酶同时切怎么切

各位大侠请指教:我的质粒上有BIN 1和NOT 1两个酶切位点,但是我现在有宝生物的Bin 1和NEB的Not 1,如果分开切的话怕损失太多,想同时切,可是缓冲液都不一样,该怎么办啊!
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jasco

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
用随便哪一家的适合这两个酶的双切buffer就好了,
2楼2008-08-20 11:23:01
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superwheat

银虫 (正式写手)

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复,积极交流
查一下说明书或者目录,比较一下两家公司的各种缓冲液的成分,以及两种酶在各种buffer里面的酶活,如果最优buffer成份差不多最好,如果不一样,用适应范围广的那个去迁就适应范围窄的
3楼2008-08-21 01:18:52
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)


anmt(金币+1,VIP+0):多谢了,我再查查
Not I
反应缓冲液: (随酶提供) NEBuffer 3+ BSA
100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT (pH 7.9 @ 25°C)。 加入 100 µg/ml BSA。 37°C温育。

     NEBuffer  1  2    3   4
   % Activity  0 50 100 25

本想帮你查一下Takara的这个酶确定个体系
可是没查到
楼主确定是叫“宝生物的Bin 1”吗???
如果确实,把说明发上来,帮你确定个体系
4楼2008-08-21 01:30:18
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anmt

银虫 (小有名气)

Bln 的K buffer成分

10*K buffer:
200mM Tris-HCL,pH8.5
100mM MgCl2
10mM DTT
1000mM KCl
麻烦楼上的看看,
5楼2008-08-21 14:36:55
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复
楼主的帖子里分别用到三个名称:“BIN 1”  “Bin 1”  “Bln”
呵呵
发帖时还要仔细点(l--------->L,非I,i)

通过你的描述,判断你说的酶是  Bln I(Avr II) Takara Code No.:D1022A
如果是此酶的话,体系的确搭配有难度
推荐体系
NEBbuffer3(或Takara H)双切需加BSA,应先用Bln I切1-2h,再加Not I切

如果使用Takara K,应先用Not I切1-2h,再加Bln I切

可以做个预实验试一下
6楼2008-08-21 18:07:48
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