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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助:两个不同厂家的酶同时切怎么切
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anmt

银虫 (小有名气)

[交流] 求助:两个不同厂家的酶同时切怎么切

各位大侠请指教：我的质粒上有BIN 1和NOT 1两个酶切位点，但是我现在有宝生物的Bin 1和NEB的Not 1，如果分开切的话怕损失太多，想同时切，可是缓冲液都不一样，该怎么办啊！
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1楼 2008-08-20 10:45:08
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
用随便哪一家的适合这两个酶的双切buffer就好了，
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2楼2008-08-20 11:23:01
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superwheat

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复，积极交流
查一下说明书或者目录，比较一下两家公司的各种缓冲液的成分，以及两种酶在各种buffer里面的酶活，如果最优buffer成份差不多最好，如果不一样，用适应范围广的那个去迁就适应范围窄的
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3楼2008-08-21 01:18:52
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★
anmt(金币+1,VIP+0):多谢了，我再查查
Not I
反应缓冲液: (随酶提供) NEBuffer 3+ BSA
100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT (pH 7.9 @ 25°C)。 加入 100 µg/ml BSA。 37°C温育。

     NEBuffer  1  2    3   4
   % Activity  0 50 100 25

本想帮你查一下Takara的这个酶确定个体系
可是没查到
楼主确定是叫“宝生物的Bin 1”吗？？？
如果确实，把说明发上来，帮你确定个体系
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4楼2008-08-21 01:30:18
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anmt

银虫 (小有名气)

Bln 的K buffer成分

10*K buffer：
200mM Tris-HCL,pH8.5
100mM MgCl2
10mM DTT
1000mM KCl
麻烦楼上的看看，
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5楼2008-08-21 14:36:55
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复
楼主的帖子里分别用到三个名称：“BIN 1”  “Bin 1”  “Bln”
呵呵
发帖时还要仔细点（l--------->L,非I，i）

通过你的描述，判断你说的酶是  Bln I（Avr II） Takara Code No.：D1022A
如果是此酶的话，体系的确搭配有难度
推荐体系
NEBbuffer3(或Takara H)双切需加BSA，应先用Bln I切1-2h，再加Not I切

如果使用Takara K，应先用Not I切1-2h，再加Bln I切

可以做个预实验试一下
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6楼2008-08-21 18:07:48
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