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培养细胞/小鼠肌肉组织样本提取gDNA
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培养细胞/小鼠肌肉组织样本提取 DNA提取纯化试剂优化-1/2/3 培养细胞：1和2； 小鼠肌肉组织：3和4 a-1/2/3/4 试剂1 b-1/2/3/4 试剂2 c-1/2/3/4 试剂3 950ul细胞悬液8000g，3min离心，弃上清，加入180ul消化液； 加入20ul 蛋白酶K（20mg/ml），再加入10ul RNase (10mg/ml)涡旋5s，室温放置3min； 加入200ul 结合液，涡旋10s，58℃放置10min； 加入200ul无水乙醇，涡旋10s混匀，转入吸附柱，8000g离心1min，弃滤液； 加入500ul WBⅠ溶液，8000g离心1min，弃滤液； 加入500ul WBⅡ溶液，12000g离心3min，弃滤液； 加入100 ul TE溶液，洗脱5min放12000g离心1min，重新过柱洗脱。 取约21mg小鼠肌肉组织剪碎 加入180ul消化液； 加入20ul 蛋白酶K（20mg/ml），58℃放置10min； 再加入10ul RNase (10mg/ml)涡旋5s，室温放置3min； 加入200ul 结合液l，加入200ul无水乙醇，涡旋10s混匀，转入吸附柱，8000g离心1min，弃滤液； 加入500ul WBⅠ溶液，8000g离心1min，弃滤液； 加入500ul WBⅡ溶液，12000g离心3min，弃滤液； 加入100 ul TE溶液，洗脱5min放12000g离心1min，重新过柱洗脱。 OD值检测结果 样品 ng/ul 230 260 280 320 260/280 260/230 洗脱效率 100ul TE室温第1次洗脱 5min a1 32 0.302 0.684 0.390 0.048 1.86 2.50 91.43% a2 60 0.571 1.275 0.724 0.071 1.84 2.41 95.24% b1 73 0.632 1.495 0.833 0.036 1.83 2.45 94.81% b2 78 0.648 1.592 0.868 0.024 1.86 2.51 93.98% c1 64 0.614 1.356 0.760 0.075 1.87 2.38 88.89% c2 64 0.630 1.361 0.773 0.082 1.85 2.33 86.49% 100ul TE室温第2次洗脱 3min a1 35 0.410 0.780 0.463 0.085 1.84 2.14 a2 63 0.636 1.347 0.776 0.081 1.82 2.28 b1 77 0.821 1.656 0.958 0.118 1.83 2.19 b2 83 0.922 1.810 1.057 0.155 1.83 2.16 c1 72 0.924 1.643 0.980 0.195 1.84 1.99 c2 74 0.969 1.710 1.014 0.231 1.89 2.00 100ul TE室温第1次洗脱 5min a3 27 0.311 0.595 0.349 0.053 1.83 2.10 72.97% a4 31 0.303 0.677 0.391 0.050 1.84 2.48 77.50% b3 53 0.576 1.146 0.658 0.082 1.85 2.15 79.10% b3 55 0.539 1.153 0.653 0.062 1.85 2.29 78.57% c3 18 0.201 0.394 0.229 0.037 1.86 2.18 81.82% c4 58 0.506 1.194 0.657 0.034 1.86 2.46 86.57% 100ul TE室温第2次洗脱 3min a3 37 0.506 0.826 0.490 0.084 1.83 1.76 a4 40 0.47 0.89 0.523 0.086 1.84 2.08 b3 67 0.87 1.50 0.901 0.152 1.80 1.88 b3 70 0.88 1.56 0.922 0.154 1.83 1.93 c3 22 0.25 0.49 0.279 0.038 1.86 2.11 c4 67 0.71 1.42 0.811 0.087 1.85 2.13 细胞样本提取gDNA拖带，细胞状态不好，小鼠肌肉组织样本主带清晰明显，无拖带情况。 以两次洗脱次数为例，第一次洗脱效率在70-90%，两种样本提取到的gDNA的A260/A280与A260/A230均在1.7~1.9与1.8~2.5区间。 从gDNA得率来看：优化2效果最佳，优化3次之，优化1最差。 Marker为DL15000  01.png |
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