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牛春东

新虫 (初入文坛)

[交流] 好奇怪,荧光定量不同引物得到的ct值不同 已有1人参与

各位大侠,小弟最近在做荧光定量的时候遇到一个问题,我选用了两对引物进行相对荧光定量,其中一对引物的扩增区域包含另外一对的扩增区域,但是相对较短的那对引物得到的ct值在各个样品中的表达量均一致,我起初以为是引物错配的原因,但是我在进行测序后发现扩增得到的片段是我的目的基因。另外,这两对引物的溶解曲线时好时坏,已经筛选过好多引物,都是这种情况。但是电泳结果显示的却是单一条带,我感到非常困惑,求大侠们给予解答
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无有
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高gaoeryang

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
融解曲线主要说明引物的特异性。融解曲线不是单一峰最主要有以下几方面原因:
引物特异性不好;
引物被污染了;
引物冻融次数太多;
引物浓度太高(这时会有一个比较低的引物二聚体峰)。
2楼2015-09-15 17:00:05
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