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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 电转化电击时为什么会听见啪的一声响
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LIAOLU

新虫 (小有名气)

[交流] 电转化电击时为什么会听见啪的一声响 已有7人参与

是不是因为质粒加多了，第一次加2ul，第二次加1ul，第一次听见响了，第二次没有。为什么质粒加多了也会听见声响呢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-08-17 19:53:09
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-21 23:03:02
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2楼2015-08-18 07:41:31
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ptttmt

银虫 (正式写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-21 23:03:58
引用回帖:
2楼: Originally posted by bolysu at 2015-08-18 07:41:31
这叫爆杯，严重的杯子击穿了，因为菌体没洗干净，提质粒最后要用纯水洗的

有道理，柱洗脱用ph9.0的ddH2O洗脱质粒，别用TE，另外，电转杯不擦干也会爆杯的

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-08-18 10:29:27
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匿名

用户注销 (正式写手)
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4楼2015-08-19 08:54:11
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LIAOLU

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by wg0541001 at 2015-08-19 08:54:11
击穿了，我们用的电转仪有保护功能，一般遇到这种情况就会显示arc（电弧），然后不能继续操作。

我们这仪器会显示no pulses

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5楼2015-08-19 09:04:06
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匿名

木虫 (著名写手)

无敌小木虫
★
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6楼2015-08-21 15:10:13
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achillesyao

铜虫 (小有名气)
★
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质粒和菌体里面离子没去除干净，电流过大。很危险的，下次注意。
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7楼2015-08-21 15:24:38
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liutong1026

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-08-21 23:04:20
1.质粒不能用带离子洗脱液溶解，2.有没有用错农杆菌，不能用冻融法所使用的农杆菌，3.电击杯要干净，不能有水（最好拿酒精浸泡，晾干），4.同时观察电机杯中间铁片，两个铁片不能在一起，5.按电击仪使用说明规范使用，电击不能超过推荐值（怕效率低，可以重复电击两次，一般电电击都能有很高的转化率）
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8楼2015-08-21 17:00:10
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zeroon

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
8楼: Originally posted by liutong1026 at 2015-08-21 17:00:10
1.质粒不能用带离子洗脱液溶解，2.有没有用错农杆菌，不能用冻融法所使用的农杆菌，3.电击杯要干净，不能有水（最好拿酒精浸泡，晾干），4.同时观察电机杯中间铁片，两个铁片不能在一起，5.按电击仪使用说明规范使用 ...

两次点击，是指的同样的点击条件，开两次吗？这样真的能提高转化效率啊？
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9楼2015-08-21 22:17:34
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zeroon

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
8楼: Originally posted by liutong1026 at 2015-08-21 17:00:10
1.质粒不能用带离子洗脱液溶解，2.有没有用错农杆菌，不能用冻融法所使用的农杆菌，3.电击杯要干净，不能有水（最好拿酒精浸泡，晾干），4.同时观察电机杯中间铁片，两个铁片不能在一起，5.按电击仪使用说明规范使用 ...

还有，请问为什么不能用冻融法使用的农杆菌？是因为冻融法农杆菌感受态里加了氯化钙吗？

可是我看文献里做细胞转染，点击的时候用的hepes缓冲液，里面都含有金属离子的呀？
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10楼2015-08-21 22:19:53
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