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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 请教36KD的蛋白质HPLC分析问题
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dilzhang

金虫 (著名写手)

[求助] 请教36KD的蛋白质HPLC分析问题 已有3人参与

最近要分析一个36KD的蛋白质，疏水性较强。
C4, 4.6×250mm，300A
0.1%TFA/H2O：ACN；10~100%/30min，280nm（紫外检测最大吸收）
好像没有什么峰出来。
换成Tris-HCl也没有峰出来，和空白的差不多。
不知是什么原因？有经验的虫子指教一下。
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1楼 2015-08-14 18:52:09
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小小鸟mekind

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dilzhang: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢! 2015-08-15 14:57:19
波长设214.乙腈中也要加TFA。柱子太长

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2015-08-14 21:11:54
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dilzhang: 金币+4, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2015-08-15 14:57:38
蛋白分析时ACN比例不要太大，否则蛋白可能析出，会损坏柱子。一般70%左右顶天了。

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-08-14 22:08:28
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organicsuper

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dilzhang: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2015-08-25 16:12:54
疏水性强的蛋白质，上HPLC之前先用极限溶剂看看多少的ACN，或者多少的水就会析出，然后确定分析方法。
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4楼2015-08-16 15:42:11
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