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xiaoxiaoye958

银虫 (小有名气)

[交流] 请教各位一个甲基化的问题

请问大家通常用作基因操作的大肠杆菌DH5α和Top10会对转入的质粒甲基化吗?从里边提出来的质粒做原生质体或电转有问题吗?
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):楼主还有问题,你再看看。
DH5α
F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK- mK+), λ–

TOP10 (Invitrogen)
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 nupG recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galE15 galK16 rpsL(StrR) endA1 λ-

两者基因型均不含有
dam = adenine methylation at GATC sequences abolished
dcm = cytosine methylation at second C of CCWGG sites abolished
所以二者都不是甲基化菌株
电转什么的没有问题(能否电转主要看质粒提的怎么样吧)
2楼2008-08-17 18:44:31
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xiaoxiaoye958

银虫 (小有名气)

非常感谢!那再请教一下电转质粒究竟在提取时应该注意什么才能使它尽可能地纯呢?我们都是用酚氯仿抽提两次,最后溶于TE,再用柱纯化一次。还有用量问题。请高手指点
3楼2008-08-18 08:54:53
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
使用试剂盒提的质粒就可以满足需要了
最后用超纯水溶解,至于用量问题要去参考一下别人的文献
4楼2008-08-18 12:42:18
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xiaoxiaoye958

银虫 (小有名气)

谢谢指点
5楼2008-08-19 09:09:15
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