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buxu

金虫 (小有名气)

[求助] 提取血液DNA的疑问 已有2人参与

新手求问几个提取血液DNA的问题:
1、血液采集用的采血管用不用无菌的?目前市面上的好像大部分都不是无菌的;
2、打算采集完后离心分出血浆,剩下的血细胞-80冻起来以后提,我看论坛里有人问过,这样应该没问题;
3、如果血细胞要分装的话,分装的冻存管、吸取用的一次性滴管或枪头要不要灭菌?
4、另外还有个疑问就是,我看他们提组织DNA的,采集组织时用的解剖用具,包装的锡箔纸也并没有灭菌,所以提DNA是不是并不一定要严格灭菌?
纯属新手,期待大家的解答
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buxu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ch854355011 at 2015-08-11 12:30:00
个人观点,我们实验室对提取血液DNA的要求不高,因为血液DNA很好提,根本不用担心提不出来的问题。
1、如果买的新的采血管的话,一般都有抗凝剂的,可以直接采血样
2、如果你打算采集血样之后分装的话,最好马上分 ...

补充一个问题:
5、离心完取出血浆后,剩下的血细胞如果要分装的话要不要混匀后再分装,离心好,白细胞和红细胞是分层的。
3楼2015-08-11 12:50:22
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ch854355011

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
buxu: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-08-11 12:47:11
个人观点,我们实验室对提取血液DNA的要求不高,因为血液DNA很好提,根本不用担心提不出来的问题。
1、如果买的新的采血管的话,一般都有抗凝剂的,可以直接采血样
2、如果你打算采集血样之后分装的话,最好马上分装然后冻起来,-40或-80都可以,之后要用的话可以直接解冻就可以用了,为了不使其凝固,也可以在分装的离心管里加些抗凝剂之类的,避免时间过长在外面形成血块,提DNA的时候不好消化。
3、要分装用的你说的冻存管,枪头或者离心管都是要高压的。因为一般在实验室做实验的话必备的就是东西都是要压过的才行。
4、不用严格灭菌的,因为不像培养细胞那样要在无菌环境下操作,直接在普通的实验台上就可以完成。
2楼2015-08-11 12:30:00
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buxu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ch854355011 at 2015-08-11 12:30:00
个人观点,我们实验室对提取血液DNA的要求不高,因为血液DNA很好提,根本不用担心提不出来的问题。
1、如果买的新的采血管的话,一般都有抗凝剂的,可以直接采血样
2、如果你打算采集血样之后分装的话,最好马上分 ...

再补充一个,离心管里加些抗凝剂,一般加什么,采血管里的抗凝剂是EDTA-K2
4楼2015-08-11 13:59:57
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ch854355011

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by buxu at 2015-08-11 13:59:57
再补充一个,离心管里加些抗凝剂,一般加什么,采血管里的抗凝剂是EDTA-K2...

一般加肝素或者枸橼酸钠。但是量我不知道加多少,这是百度的,你参考下。
肝素是加强抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)灭活丝氨酸蛋白酶作用,阻止凝血酶的形成,并阻止血小板聚集等作用,从而阻止血液凝固。肝素是红细胞透渗脆性试验的理想抗凝剂。但不适于CBC、细胞形态学检查。每毫升血液肝素用量为(15±2.5)U,多为肝素钠盐或钾盐。

枸橼酸盐常用有枸橼酸钠,能与血液中钙离子结合形成螯合物,阻止血液凝固。枸橼酸盐抗凝剂的抗凝力不如上述抗凝剂。枸橼酸钠与血液的抗凝比例为l:9或1:4.适用于红细胞沉降率、凝血检查,是输血保养液的成分。
5楼2015-08-12 18:39:22
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