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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 跪求动物细胞固定化操作步骤，具体点的
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myx荷塘月色

新虫 (初入文坛)

[交流] 跪求动物细胞固定化操作步骤，具体点的 已有3人参与

大家好！我想问一下，动物细胞用多聚甲醛固定，这个怎么固定？用PBS洗涤完毕后，直接加多聚甲醛固定，还是先用胰酶消化，再用多聚甲醛固定？如果是后者需要去除胰酶吗？还有就是细胞固定这个浓度怎么控制？我没有做过细胞固定，求各位大神指点，谢谢！
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1楼 2015-08-05 11:18:22
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jojo_7th

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
试过poly-1-lysine
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2楼2015-08-05 13:57:28
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HTweiyi

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你固定细胞要做什么用，如果在培养瓶里面的细胞，不能直接固定，固定了你怎么取出来
如果你想做检测，你可以把细胞消化下来，种到盖玻片上，然后在直接固定细胞，做后续的检测
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3楼2015-08-05 17:15:09
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myx荷塘月色

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-08-05 17:15:09
你固定细胞要做什么用，如果在培养瓶里面的细胞，不能直接固定，固定了你怎么取出来
如果你想做检测，你可以把细胞消化下来，种到盖玻片上，然后在直接固定细胞，做后续的检测

非常感谢您的回答。我是第一次做细胞固定，我固定细胞就是用来检测的，但是不是马上就检测，应该回现在冰箱里放置一段时间。我今天做了一下细胞固定，是这样做的，您看看有没有什么问题，谢谢！
1.消化细胞；
2.终止消化；
3.调整细胞密度；
4.将细胞悬液离心；
5.PBS洗涤，离心，倒掉PBS；
6.加多聚甲醛重悬，室温静置；
7.离心，再用PBS洗涤；
8.再离心，加入透化剂；
9.再用PBS洗涤。
但是这样做完之后离心管里只有一点点。而且我想知道固定后细胞是以何种状态存在的。非常谢谢！
您看看，哪里有问题？
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4楼2015-08-05 18:59:13
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myx荷塘月色

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jojo_7th at 2015-08-05 13:57:28
试过poly-1-lysine

谢谢您，都不懂这个是什么？
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5楼2015-08-05 19:01:37
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HTweiyi

银虫 (小有名气)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by myx荷塘月色 at 2015-08-05 18:59:13
非常感谢您的回答。我是第一次做细胞固定，我固定细胞就是用来检测的，但是不是马上就检测，应该回现在冰箱里放置一段时间。我今天做了一下细胞固定，是这样做的，您看看有没有什么问题，谢谢！
1.消化细胞；
2. ...

你做的是什么样的检测，说出你的固定后的用途，我才能帮您回答
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6楼2015-08-06 08:49:32
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myx荷塘月色

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-08-06 08:49:32
你做的是什么样的检测，说出你的固定后的用途，我才能帮您回答...

亲，非常感谢。其实我也不是很清楚到底是做什么检测用，领导只说要做检测。还说什么放在4度保存，用起来更方便。所以我根本不知道她到底要干嘛？那一般固定之后都有什么用途？
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7楼2015-08-06 09:06:50
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myx荷塘月色

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by HTweiyi at 2015-08-06 08:49:32
你做的是什么样的检测，说出你的固定后的用途，我才能帮您回答...

好像我们这里不能检测，我们自己准备先固定化，然后再去检测。现在只是先固定化。
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8楼2015-08-06 09:11:38
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8601

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我都是直接固定啊。为什么要消化。消化完形态不都变了吗？
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9楼2015-08-06 12:26:42
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myx荷塘月色

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 8601 at 2015-08-06 12:26:42
我都是直接固定啊。为什么要消化。消化完形态不都变了吗？

固定不是需要调细胞密度吗？那不消化怎么调细胞密度？这个我没有做过所以不知道怎么搞，求告知。
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10楼2015-08-11 10:58:45
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