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新虫 (初入文坛)


[交流] 关于gateway技术求师兄师姐解答

在转基因的实验中,我们先是通过gateway技术构建超表达载体,问题如下:在gateway技术中先是要热激转化大肠杆菌,再电转农杆菌,我想问一下为什么不可以直接电转农杆菌,而是要经过热激大肠杆菌???????
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半醒半梦

铜虫 (小有名气)


转大肠是因为转化效率高,转大肠后应进行PCR检测和测序,正确后转弄杆菌,弄杆菌质粒不好提,转化效率相对也低。

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13楼2015-08-22 19:24:51
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15927635384

新虫 (初入文坛)


送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by 半醒半梦 at 2015-08-22 19:24:51
转大肠是因为转化效率高,转大肠后应进行PCR检测和测序,正确后转弄杆菌,弄杆菌质粒不好提,转化效率相对也低。

谢谢😊

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14楼2015-08-23 08:45:51
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chengyihui

新虫 (初入文坛)


大肠杆菌容易测序
15楼2015-12-10 11:06:31
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liguanying

银虫 (初入文坛)


亲,ccdB基因对农杆菌是非致死的,如果直接转农杆菌,没有经过重组的空载体,也会在平板上长出来,这样将会很难筛选;前几年看过一篇文献,好像讲一个对农杆菌、E.coli都能致死的基因,如果用在Gateway载体中将可以直接转化农杆菌。
16楼2015-12-18 17:14:38
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starseacow

专家顾问 (职业作家)


质粒在大肠杆菌中是多拷贝,在农杆菌中不是
17楼2015-12-18 22:17:17
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readytogo2楼
2015-08-05 08:50   回复  
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dmbb3楼
2015-08-05 08:57   回复  
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sgirld4楼
2015-08-05 09:13   回复  
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Biotage5楼
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tzynew10楼
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nono200911楼
2015-08-05 09:34   回复  
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2015-08-21 15:16   回复  
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