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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 最近用在质粒上用双酶联接片段，但是一直出现空载。
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hanfeng244

铜虫 (初入文坛)

[交流] 最近用在质粒上用双酶联接片段，但是一直出现空载。 已有5人参与

最近用在质粒上用双酶联接片段，但是一直出现空载。质粒和片段分别双酶切，然后切胶回收验证片段也没有错，转化平板也会长出菌落，但是质粒回收电泳结果一直是空载。片段就一直没有连上。各位大神，请问这其中有什么做错了的么？
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1楼 2015-08-03 10:33:50
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a86052

金虫 (正式写手)
★
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非大神。确认质粒是否双酶切成功，载体别加太多
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2楼2015-08-03 10:41:31
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jie123400

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
质粒没切好，2个酶分开切做个小试看看
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3楼2015-08-03 16:40:39
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yangjingjing

木虫 (正式写手)
★
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你确定连上了？你确定你切开了？
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努力打败一切
4楼2015-08-04 10:33:14
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ssswzf

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酶切要彻底，特别是pcr的DNA片段，一定要彻底切开
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5楼2015-08-04 13:01:21
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hanfeng244

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jie123400 at 2015-08-03 16:40:39
质粒没切好，2个酶分开切做个小试看看

好的，我试试看，谢谢哈
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6楼2015-08-05 09:41:33
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情毒之殇

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你确定质粒切开了？还有两个粘性末端是不是相同的？连接时质粒浓度高了也会自连
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我们的心是荒野还是沃土？！
7楼2015-08-05 10:55:43
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