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hanfeng244

铜虫 (初入文坛)

[交流] 最近用在质粒上用双酶联接片段,但是一直出现空载。 已有5人参与

最近用在质粒上用双酶联接片段,但是一直出现空载。质粒和片段分别双酶切,然后切胶回收验证片段也没有错,转化平板也会长出菌落,但是质粒回收电泳结果一直是空载。片段就一直没有连上。各位大神,请问这其中有什么做错了的么?
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a86052

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
非大神。确认质粒是否双酶切成功,载体别加太多
2楼2015-08-03 10:41:31
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jie123400

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
质粒没切好,2个酶分开切做个小试看看
3楼2015-08-03 16:40:39
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yangjingjing

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你确定连上了?你确定你切开了?
努力打败一切
4楼2015-08-04 10:33:14
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ssswzf

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
酶切要彻底,特别是pcr的DNA片段,一定要彻底切开
5楼2015-08-04 13:01:21
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hanfeng244

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jie123400 at 2015-08-03 16:40:39
质粒没切好,2个酶分开切做个小试看看

好的,我试试看,谢谢哈
6楼2015-08-05 09:41:33
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情毒之殇

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你确定质粒切开了?还有两个粘性末端是不是相同的?连接时质粒浓度高了也会自连
我们的心是荒野还是沃土?!
7楼2015-08-05 10:55:43
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