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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 25mM磷酸钾缓冲液（PH7.5）怎么配制？？
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zhaocai进宝

[交流] 25mM磷酸钾缓冲液（PH7.5）怎么配制？？

请问：磷酸钾缓冲液，磷酸二氢钾缓冲液，磷酸盐缓冲液是同样的东西么？25mM磷酸钾缓冲液（PH7.5）怎么配制？？
谢谢：）
[search]磷酸钾缓冲液 配制[/search]
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1楼 2008-08-12 18:06:11
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chenjg

★
zhaocai进宝(金币+1,VIP+0):谢谢，我现在也是这么配的，就是不知道正确不正确：）
根据磷酸钾的分子量计算称样量，例如配制量为1L，称样量为25×0.001×分子量，溶解到水中，用氢氧化钠溶液调节PH到7.5
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2楼2008-08-12 18:34:26
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zf851

金虫 (小有名气)

HPLC流动相的缓冲液

★
zhaocai进宝(金币+1,VIP+0):谢谢，我认真的看了看，你所说的是磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液等，我想问的是特殊的某一种缓冲液，如磷酸钾缓冲液怎么配，是和磷酸盐缓冲液一样么？？
HPLC流动相的缓冲液
缓冲液流动相可以根据下面的操作步骤配制：
将缓冲液药品溶解在水中制成缓冲液（溶液A）。
用pH计确定或调节溶液A的pH。
将一定体积（如200ml）的有机溶剂B与由步骤2配制的溶液A（如800ml）混合，制成最终流动相（此处的有机相为20%）。
检查最终流动相的pH（此处为选项）。
由于测定含有有机调节剂的流动相pH计发生漂移，使其测定pH不很可靠，所以上面的步骤4
一般只有在考察误差的主要来源时采用，大多数实验室皆略去此步骤。
步骤1一般是将配制缓冲液所用的两种试剂（A1和A2）分别按计算量先溶解在水中制成水溶
液，然后再将这两种溶液按一定的比例混合得到预期pH的溶液A。若在此步骤2中调节pH，则可以采用溶剂A滴定溶剂B，也可反过来滴定，并通过pH计测量得到所需pH的最终缓冲溶液。在大多数实验室中，pH的测量精度通常不会达到±0.05—0.1个pH单位，这会显著影响一些样品的分离。当HPLC方法对pH非常敏感时，步骤2只能大致确定pH值。
        将准确称重的缓冲液配制试剂与精确体积的脱气蒸馏水混合，使其成为均一的溶液（不进一步调整pH），如此配得得缓冲溶液得pH可以控制在非常窄得范围内（±0.02单位），已知准确pH值得缓冲液浓溶液已有市售。
        为了改善峰形或塔板数，有时在流动相中加入酸或碱（如三乙胺、乙酸等），如果这些添加剂并非为配制缓冲溶液时所采用得试剂，那么将这些试剂加入到流动相中后，还需重新滴加酸或碱，使流动相达到所需的pH值。
常用缓冲液的配制
        当缓冲液被稀释或浓缩时，pH也应不变。其pH值应近似恒定不变，或当其中的离解的阳离子（K+、Na+）或阴离子（Cl-、Br-）被其它种类的离子替换时，表1—4中给出了响应的配制方法，平衡阳离子为Na+，缓冲液的最终浓度为0.1mol/l，对于其它浓度的缓冲溶液或阳离子种类（通常K+）更好，表中的数据也可供参考。较稀的或较浓的缓冲溶液，及包含有不同阳离子的溶液，其pH值会与表中的数据稍有出入。在方法建立过程中，精确的流动相pH值往往并不重要，重要的是每次新配制的流动相的pH值与第一次基本相同（最好控制在±0.02范围内）。注意，只有当缓冲溶液的pH在缓冲试剂解离常数pKIa±1范围内时，缓冲溶液才具有有效的缓冲容量（如乙酸盐的pKa=4.6，其适宜的pH范围为3.6—5.6）。
表1 低pH值（25℃）磷酸盐缓冲溶液的配制方法
溶液A1：0.1M磷酸。配制精确pH值缓冲液时，所用磷酸需滴定H3PO4的含量。
溶液A2：0.1M磷酸二氢钠溶液，称量13.8g NaH2PO4·H2O溶解于水中，定容于1L容量瓶中。        
pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）                pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        
2.0        565        435                2.8        175        825        
2.2        455        545                3.0        110        890        
2.4        345        655                3.2        55        945        
2.6        250        750                                       
表2 不同pH值（25℃）醋酸缓冲溶液的配制方法
溶液A1：0.1M醋酸溶液。6.0g（5.8ml）冰醋酸溶于水中，定容到1L容量瓶中。
溶液A2：0.1M醋酸钠溶液。8.2g C2H3O2Na（或13.6g C2H3O2Na·3H2O）溶解于水中定容到1L容量瓶中。        
pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        
3.6        926        74        4.8        400        600        
3.8        880        120        5.0        296        704        
4.0        820        180        5.2        210        790        
4.2        736        264        5.4        176        824        
4.4        610        390        5.6        96        904        
4.6        510        490                                

表3 不同pH值（25℃）柠檬酸缓冲溶液的配制方法
溶液A1：0.1M柠檬酸溶液。21.0g 柠檬酸溶于水中，定容到1L容量瓶中。
溶液A2：0.1M柠檬酸钠溶液。29.4g C6H5O7Na3·2H2O溶解于水中，定容到1L容量瓶中。        
pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        
3.0        930        70        5.2        360        660        
3.2        870        126        5.4        320        680        
3.4        810        190        5.6        270        726        
3.6        750        260        5.8        230        764        
3.8        700        300        6.0        190        810        
4.0        660        340        6.2        140        856        
4.2        610        370        6.4        60        940        
4.4        560        440        6.6        40        960        
4.6        510        490        6.8        30        970        
4.8        460        540        7.0        10        985        
5.0        410        590                                
表4 中等pH值（25℃）磷酸缓冲液的配制方法
溶液A1：0.1M磷酸二氢钠溶液。13.8g NaH2PO4·H2O溶于水中，定容到1L容量瓶中。溶液A2：0.1M磷酸氢二钠溶液。26.8g Na2HPO4·7H2O（或35.9g Na2HPO4·12H2O）溶于水中，定容到1L容量瓶中。        
pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        
5.6        948        52        7.0        390        610        
5.8        920        80        7.2        280        720        
6.0        877        123        7.4        190        810        
6.2        815        185        7.6        130        870        
6.4        735        265        7.8        85        915        
6.6        685        315        8.0        53        947        
6.8        510        490                                
表5和6给出了适于pH=7—10.6范围的两种有机碱缓冲液配制方法，这种有机碱缓冲液可以有效低减缓硅胶基柱的柱效降低。
表5 高pH（25℃）甘氨酸缓冲溶液的配制方法
溶液A1：0.2M甘氨酸。15.01g 甘氨酸溶于水中，定容于1L容量瓶中。
溶液A2：0.1M NaOH溶液，稀释较浓的NaOH溶液。        
pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        
8.6        25        2.0        9.6        25        11.2        
8.8        25        3.0        9.8        25        13.6        
9.0        25        4.4        10.0        25        16.0        
9.2        25        6.0        10.4        25        19.3        
9.4        25        8.4        10.6        25        22.75        
表6 高pH值（25℃）Tris缓冲溶液的配制方法
溶液A1：0.1M Tris（无碱），12.11g Tris溶于水中，定容到1L容量瓶中。
溶液A2：0.1M HCl溶液，稀释较浓HCl溶液。        
pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        pH        A1体积（ml）        A2体积（ml）        
7.1        50        45.7        8.1        50        26.2        
7.2        50        44.7        8.2        50        22.9        
7.3        50        43.4        8.3        50        19.9        
7.4        50        42.0        8.4        50        17.2        
7.5        50        40.3        8.5        50        14.7        
7.6        50        38.5        8.6        50        12.4        
7.7        50        36.5        8.7        50        10.3        
7.8        50        34.5        8.8        50        8.5        
7.9        50        32.0        8.9        50        7.0        
8.0        50        29.2



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