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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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liuy.04b

木虫 (小有名气)

[交流] PCR退火温度如何设置

在英俊合成的引物给了两个Tm:Tm(1M Na+)和Tm(50m
M Na+),用哪个设计PCR反应的退火温度呀?
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
我们一般是用没纳的那个退火温度加减五度(通常是减),看看效果怎么样,再适当调整
6楼2008-08-13 09:08:31
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liuy.04b

木虫 (小有名气)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复,欢迎常来
以前我在生工合成的给一个有钠的一个没钠的Tm,我们用那个没钠的设计PCR退火温度,英俊的怎么设计呀?
2楼2008-08-12 09:50:35
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复,欢迎常来
一开始用软件设计引物的时候,那个软件应该直接给出Tm了吧
然后一般把Tm减去3~5度就是退火温度了
3楼2008-08-12 11:43:14
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):楼主还有问题,你再看看。
我是不喜欢用软件来确定pcr的退火温度的,设计引物也经常是用手工,然后用软件最后做个比对就可以的。软件做出来的东西太死板,不知道根据具体的情况做点变化,前后移移位置之类的,以及避开一下难以扩增个的比如CCCC等。根据自己的待扩增片段的GC含量的高低,差不多56度或者58度就可以了,再根据扩增的结果适当做个调整。软件设计好了的引物到时候不见得扩增的顺利。
个人经验,呵呵。
位卑未敢忘忧国。
4楼2008-08-13 00:45:37
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