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隔河而望

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 20.5
帖子: 23
在线: 7.4小时
虫号: 2215341
注册: 2012-12-31
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 有没有人做过DNA pull down的实验？求具体的实验步骤！

大神们，有没有人做过DNA pull down的实验，与EMSA的步骤是不是差不多的？如果有做过的话，望能给一些实验步骤，或者资料，感激不尽！谢谢！

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1楼 2015-07-27 22:13:07

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ken123

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 17.5
帖子: 7
在线: 1.2小时
虫号: 3325066
注册: 2014-07-16
专业: 生物大分子结构与功能

步骤和EMSA不一样
这个是DNA pull down 的流程
探针设计及标记
①　采用基因组DNA做模板，经PCR扩增启动子片段；
②　将其克隆至pMD-18T克隆载体，并测序鉴定成功；
③　使用PCR法或末端标记法标记探针；
④　标记的探针利用凝胶回收试剂盒纯化回收探针，并检测探针浓度；
⑤　-20℃保存，待用；
..................
发个链接给你自己看详细点咯
http://www.biomart.cn/specials/biosense/article/109708