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夏末忆雪

新虫 (初入文坛)

[求助] 咪唑对离子交换层析的影响?包涵体蛋白纯化过程中如何检测蛋白浓度?

在做蛋白纯化的时候,NI柱纯化后进行离子交换层析,在这之间要进行透析或者超滤浓缩,除了降低盐离子浓度之外还会将咪唑除去,请问咪唑对离子交换有影响吗?如果直接进行分子筛或者其他实验的时候,还需将咪唑除去,咪唑对蛋白有什么影响吗?

纯化包涵体蛋白的时候要用到尿素,没法用nanodrop测量蛋白的浓度,怎么确定洗脱蛋白的浓度以及蛋白是否已经完全从柱上洗脱下来?可溶蛋白用考马斯亮蓝G-250进行检测,包涵体蛋白是否也可以?尿素会影响检测结果吗?

希望知道的大牛给予解答!谢谢!
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

咪唑太多,会不会挂不上离子交换层析柱?

尿素会影响BCA法测蛋白质浓度。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2015-07-23 23:48:06
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