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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 关于Acc65I和EagI这两个酶，请教大家使用方法。
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大鹏展翅513

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于Acc65I和EagI这两个酶，请教大家使用方法。 已有1人参与

之前一直用50微升的酶切体系，加1微升内切酶，上样1000纳克质粒，酶切12小时5小时都试过，可是一直都切不开，请问是什么原因啊？谢谢高手指点，我没有金币但是我一定会很感谢你的。
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1楼 2015-07-22 15:35:56
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-22 17:39:47
你确定你的酶没有失活？另外你用的哪家的限制酶？有的公司的这两种酶酶切温度不同，不能同时做双酶切。
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2楼2015-07-22 17:15:20
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大鹏展翅513

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-07-22 17:15:20
你确定你的酶没有失活？另外你用的哪家的限制酶？有的公司的这两种酶酶切温度不同，不能同时做双酶切。

我用的是NEB的的酶，请问您用过这个酶吗？您的体系是怎样设的啊？
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3楼2015-07-22 19:49:56
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我没用过NEB的这两个酶，查了下，双酶切用buffer3.1，37℃酶切，就按说明书的量加，应该不会有问题，如果还是切不开，考虑酶是否已失活，或者提取质粒质量有问题，有乙醇或酚影响酶切。
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4楼2015-07-22 20:04:43
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大鹏展翅513

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2015-07-22 20:04:43
我没用过NEB的这两个酶，查了下，双酶切用buffer3.1，37℃酶切，就按说明书的量加，应该不会有问题，如果还是切不开，考虑酶是否已失活，或者提取质粒质量有问题，有乙醇或酚影响酶切。

好的  谢谢！！
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5楼2015-07-23 11:26:52
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