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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建突变库
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geyihui

新虫 (小有名气)

[交流] 构建突变库

最近在构建突变库，用电转建库，但是效率不高，初步怀疑是连接效率不高，载体与片段摩尔比1:5,22度2小时，再4 度过夜连接，请各位大神给点意见
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1楼 2015-07-21 10:30:32
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geyihui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1332948571 at 2015-07-21 16:03:40
主要是两个原因：1、感受态的转化效率：至少要达到10的9次方，自己做能达到10的10次方甚至更高；做的时候注意菌的浓度OD在0.6-0.7之间，所用物品必须预冷，甘油最好用进口的。2连接效率：进口酶的连接效率没有太大的 ...

感受态的质粒1ul，电转达到10的6次方，算低吗，菌液OD=0.3-0.5，其他条件都满足你说的，请问感受态按我的这个效率是不是很低
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4楼2015-07-22 08:42:17
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1332948571

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
主要是两个原因：1、感受态的转化效率：至少要达到10的9次方，自己做能达到10的10次方甚至更高；做的时候注意菌的浓度OD在0.6-0.7之间，所用物品必须预冷，甘油最好用进口的。2连接效率：进口酶的连接效率没有太大的区别，只是应该用它的推荐条件中温度较低的，时间较长的，连接效率会更高，连接产物必须纯化。另外转化的电压、电容等也会影响转化效率，
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3楼2015-07-21 16:03:40
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