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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pcr 鉴定
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] pcr 鉴定

请问我做pcr检测菌液有很亮的条带，将菌液培养又提质粒做PCR也有目的大小的带。可是质粒作酶切，确没有切下目的带，是什么原因呢？是假阳性
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1楼 2008-08-06 19:11:44
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figo.339

木虫 (著名写手)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与！
应该不是假阳性，因为你pcr和质粒pcr都有结果的，所以只能是酶切的问题了，建议你再找一下酶切位点，找新的酶切位点再酶切。
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4楼2008-08-06 21:54:55
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与！
用你PCR产物做酶切看看，确认PCR得到的条带是不是你的目的条带，还有就是看看你的酶切反应是否work,只是建议
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2楼2008-08-06 19:47:29
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zyk_527

银虫 (小有名气)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与！
菌液和抽提的质粒PCR都有明显条带，这说明肯定是阳性克隆，酶切无条带只能说明是酶切效果的问题，楼主可以就这步和大家详细讨论一下
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3楼2008-08-06 21:22:23
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与！
不切，双切，两个单切，都做一下，电泳。应该能分析出原因。
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金币是赌出来的
5楼2008-08-12 16:25:54
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