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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] pcr 鉴定

请问我做pcr检测菌液有很亮的条带,将菌液培养又提质粒做PCR也有目的大小的带。可是质粒作酶切,确没有切下目的带,是什么原因呢?是假阳性
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figo.339

木虫 (著名写手)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与!
应该不是假阳性,因为你pcr和质粒pcr都有结果的,所以只能是酶切的问题了,建议你再找一下酶切位点,找新的酶切位点再酶切。
4楼2008-08-06 21:54:55
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与!
用你PCR产物做酶切看看,确认PCR得到的条带是不是你的目的条带,还有就是看看你的酶切反应是否work,只是建议
2楼2008-08-06 19:47:29
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zyk_527

银虫 (小有名气)

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与!
菌液和抽提的质粒PCR都有明显条带,这说明肯定是阳性克隆,酶切无条带只能说明是酶切效果的问题,楼主可以就这步和大家详细讨论一下
3楼2008-08-06 21:22:23
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与!
不切,双切,两个单切,都做一下,电泳。应该能分析出原因。
金币是赌出来的
5楼2008-08-12 16:25:54
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