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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量pcr条件的优化求助大神
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牛sama

木虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量pcr条件的优化求助大神 已有2人参与

小白最近在建立TaqMan的方法，求问大家初始条件我应该怎么跑啊？都要优化哪些条件啊....求各位不吝赐教啊...

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-07-14 17:40:03
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yhyzchs

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-15 13:54:27
牛sama: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-07-16 08:55:30
DNA还是RNA?
DNA建议20ul体系
模板2ul,体系用biolinemix10ul,引物300nm,探针200nm,其余用水补充
RNA建议
模板2ul,bioline体系mix加反转录酶，引物800nm，探针600，其余用水补充
优化无非就是引物浓度，探针浓度，退火温度，
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2楼2015-07-15 13:13:00
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sunzhongtao

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
控制变量啊，模版，引物浓度比较重要
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3楼2015-07-17 14:54:57
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牛sama

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yhyzchs at 2015-07-15 13:13:00
DNA还是RNA?
DNA建议20ul体系
模板2ul,体系用biolinemix10ul,引物300nm,探针200nm,其余用水补充
RNA建议
模板2ul,bioline体系mix加反转录酶，引物800nm，探针600，其余用水补充
优化无非就是引物浓度，探针浓度 ...

请问探针怎么稀释啊

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-07-18 09:15:41
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牛sama

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sunzhongtao at 2015-07-17 14:54:57
控制变量啊，模版，引物浓度比较重要

请问探针怎么稀释啊

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5楼2015-07-18 09:15:51
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yhyzchs

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 牛sama at 2015-07-18 09:15:41
请问探针怎么稀释啊
...

除了cy5用ddH2O外，其他用TE.稀释成100um/ul
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6楼2015-09-02 16:04:44
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