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土壤环境中酶活性检测若干问题
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最近在做一些土壤酶活性检测实验，有些收获，也有疑问，在这里向大家探讨交流一下 主要做NAGase 、 PODase 、POXase、Urease这几个酶的活性 我所使用的方法多是，选择一定的底物，这种底物可以和以上几种酶发生化学反应，生成的新物质的溶液多具有颜色，进而进行吸光值测定 最终多是以底物的某种变化作为土壤酶活性评定标准。 然而在吸光值的测定中出现很多疑问: 1) 方法中多出现以下 三个字眼 “无土对照” “无基质对照” “参比溶液” 字面意思理解，但是如何利用？ 如 我测酚氧化酶活性， 以邻苯二酚为底物（邻苯二酚溶液显淡黄褐色，颜色描述可能有差距），反应最终上光度计时，样液颜色为紫红色 因此 无土对照样液显紫红色， 而无基质对照样液则为透明无色 那么请问我的 “参比溶液”如何设置？ 是用“无基质对照” 样液？ 还是用“无土对照”样液？？ 按照“参比溶液”定义 —— 不含被测物质——。那么应该以“无基质对照”样液为参比溶液， 这样， 依照标准曲线，酶活性（以底物浓度表示）=C（待测样液）-C(无土对照样液) 请问这样对吗？？ 2） 接上述， 参比溶液的作用是消除其他溶剂（除底物）导致的吸光度的差异， 而“无土对照”和“无基质对照”的作用分别是去除土样液本身和底物本身引起的吸光度差异 那么，我是否可以 以"无土对照"样液为参比溶液？？？ 我同样也使用，“无土对照”做参比溶液做了实验，因其紫红色，所以“无基质对照”样液吸光值出现了负值。那么这时候，酶活性=C(待测样液)-C(无基质对照样液)，请问这样对不对？？ 3）还有就是标准曲线的问题 上述中，以邻苯二酚为底物，土壤中酚氧化酶可以将其氧化成邻苯醌，从而能进行比色 那么，我标准液即是，以邻苯醌为主，加入上述待测液体中的其他药品，从而形成标准曲线。我这样理解对不对？？ |
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