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LY1199

铁虫 (小有名气)

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专业: 微生物生态学

[求助] 土壤环境中酶活性检测若干问题

最近在做一些土壤酶活性检测实验，有些收获，也有疑问，在这里向大家探讨交流一下
  主要做NAGase 、 PODase 、POXase、Urease这几个酶的活性
我所使用的方法多是，选择一定的底物，这种底物可以和以上几种酶发生化学反应，生成的新物质的溶液多具有颜色，进而进行吸光值测定
最终多是以底物的某种变化作为土壤酶活性评定标准。

  然而在吸光值的测定中出现很多疑问:
1) 方法中多出现以下三个字眼  “无土对照”  “无基质对照” “参比溶液”
   字面意思理解，但是如何利用？
   如  我测酚氧化酶活性，以邻苯二酚为底物（邻苯二酚溶液显淡黄褐色，颜色描述可能有差距），反应最终上光度计时，样液颜色为紫红色
         因此  无土对照样液显紫红色，  而无基质对照样液则为透明无色
      那么请问我的 “参比溶液”如何设置？是用“无基质对照”  样液？  还是用“无土对照”样液？？
      按照“参比溶液”定义 —— 不含被测物质——。那么应该以“无基质对照”样液为参比溶液，  这样，依照标准曲线，酶活性（以底物浓度表示）=C（待测样液）-C(无土对照样液)    请问这样对吗？？
  2）接上述，参比溶液的作用是消除其他溶剂（除底物）导致的吸光度的差异， 而“无土对照”和“无基质对照”的作用分别是去除土样液本身和底物本身引起的吸光度差异
      那么，我是否可以以"无土对照"样液为参比溶液？？？
      我同样也使用，“无土对照”做参比溶液做了实验，因其紫红色，所以“无基质对照”样液吸光值出现了负值。那么这时候，酶活性=C(待测样液)-C(无基质对照样液)，请问这样对不对？？
  3）还有就是标准曲线的问题
   上述中，以邻苯二酚为底物，土壤中酚氧化酶可以将其氧化成邻苯醌，从而能进行比色
   那么，我标准液即是，以邻苯醌为主，加入上述待测液体中的其他药品，从而形成标准曲线。我这样理解对不对？？

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