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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白质过Capto-MMC纯化问题求助
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格桑花海

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质过Capto-MMC纯化问题求助 已有1人参与

最近在纯化一个融合蛋白，分子量66kDa，pH4.7，最后一步纯化为过Capto-MMC弱阳离子交换柱，柱子为1.2cm×20cm，上样量不是太清楚。烦请大家指教！
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李海滨
1楼 2015-07-13 22:00:39
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max1121

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
格桑花海: 金币+100, ★★★很有帮助 2015-08-26 11:19:45
Capto MMC算复合阳离子，带疏水层析性质，不推荐新手使用，我不知道你这个pH4.7是什么意思，缓冲液pH还是pI，如果是pI 你需要选用阴离子交换层析。

离子交换载量关键看你对分离分辨率的要求而有所不同，如果有性质相近的只要杂质，最好载量低，如果分辨率要求不高，载量可以做很高。因为离子交换在纯化中可作为一个富集步骤。5~20mg/ml你可以尝试下。

P.S MMC表示Mix Mode Chromatography
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2楼2015-07-14 16:31:37
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max1121

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by max1121 at 2015-07-14 16:31:37
Capto MMC算复合阳离子，带疏水层析性质，不推荐新手使用，我不知道你这个pH4.7是什么意思，缓冲液pH还是pI，如果是pI 你需要选用阴离子交换层析。

离子交换载量关键看你对分离分辨率的要求而有所不同，如果有性 ...

之前的回帖是作为挂柱洗脱模式而言建议你选用阴离子交换层析。

如果你选用Capto MMC是作为流穿模式纯化你的融合蛋白，那这样的话为保证回收率载量可以做到相当高，我做过100mg/ml，这跟你需要去除的杂质和你的目的蛋白有关系。
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3楼2015-07-14 16:34:23
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