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yipiantonger新虫 (初入文坛)
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[求助]
求大神指点！为什么我的β-葡萄糖醛酸酶与底物x-gluc作用不显色? 谢谢 已有1人参与
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| 各位师兄师姐好！本人在做大肠杆菌的检测，想通过其产生的β-葡萄糖醛酸酶与底物x-gluc作用显蓝色来肉眼鉴定。刚开始我用的标准酶和底物先反应试试。购买的sigma的β-葡萄糖醛酸酶，用PBS溶解，配制成1mg/ml溶液，分装后保存于-20度。底物购买的是Amresco分装的x-gluc粉末，回来后用DMF溶解，配成20mM的母液，分装后避光保存于-20度。实验时，将酶用PBS稀释成1ug/ml，底物用超纯水稀释成4mM, 各取20ul混合于离心管中，操作在避光条件下，置于室温反应，然后我就等啊等，就是不显色。后来我又查文献，说x-gluc分解后先产生无色的吲哚氧基中间产物，这个产物比较稳定，再经过氧化成为不溶的蓝色沉淀，加入Fecl3可以促进中间产物的氧化。所以，我又加了20ul的0.2mM的Fecl3，可是，一晚上都过去了，还是不显色！好郁闷啊，求各位哥哥姐姐指教！ |
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