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zhaozibing55

铁虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

是你的Tm值相差太多了，请设计成1度的温差以内，保证可以扩增出来的

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11楼2015-07-05 21:39:49

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z631535213

木虫 (正式写手)

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引用回帖:

9楼: Originally posted by Jianxiao_H at 2015-07-03 12:31:21
tm值只算与模板互补的碱基！

你好啊，你的意思是“5'端引入一些没什么用的GC碱基，来平衡引物的Tm值”并没有什么实际作用吗？因为我最近也在设计引物，但是一部分引物Tm有些比较低，只有47左右的样子，也是考虑在5端加不参与配对的G。

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12楼2015-10-09 09:42:15

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fang8232335

银虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

12楼: Originally posted by z631535213 at 2015-10-09 09:42:15
你好啊，你的意思是“5'端引入一些没什么用的GC碱基，来平衡引物的Tm值”并没有什么实际作用吗？因为我最近也在设计引物，但是一部分引物Tm有些比较低，只有47左右的样子，也是考虑在5端加不参与配对的G。...

TM值的计算是不考虑你另外添加的那些序列的，比如酶切位点

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13楼2015-10-13 22:31:47

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