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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增没有结果，求教是引物Tm值相差太大，还是模板GC含量太高？
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zhaozibing55

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

是你的Tm值相差太多了，请设计成1度的温差以内，保证可以扩增出来的
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11楼2015-07-05 21:39:49
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Jianxiao_H at 2015-07-03 12:31:21
tm值只算与模板互补的碱基！

你好啊，你的意思是“5'端引入一些没什么用的GC碱基，来平衡引物的Tm值”并没有什么实际作用吗？因为我最近也在设计引物，但是一部分引物Tm有些比较低，只有47左右的样子，也是考虑在5端加不参与配对的G。
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12楼2015-10-09 09:42:15
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fang8232335

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by z631535213 at 2015-10-09 09:42:15
你好啊，你的意思是“5'端引入一些没什么用的GC碱基，来平衡引物的Tm值”并没有什么实际作用吗？因为我最近也在设计引物，但是一部分引物Tm有些比较低，只有47左右的样子，也是考虑在5端加不参与配对的G。...

TM值的计算是不考虑你另外添加的那些序列的，比如酶切位点
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13楼2015-10-13 22:31:47
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小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

http://www.genloci.com/Product.aspx?CateId=149&Id=130可以试试这个东西，GC Buffer
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14楼2015-10-14 10:01:01
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感觉高gc是没有带的原因
我做的也是    前一部分gc特别多   
还没做出来啊
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15楼2016-04-17 21:46:21
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sandycool

铁虫 (正式写手)
GC含量多高算高呢？我的GC含量一般在56，56。高的有59

发自小木虫Android客户端
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16楼2016-04-18 12:34:36
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